和嫩尖茶抗氧化活性成分分析（KQ-100DE使用）

材料与方法 

材料、试剂与仪器 

树莓叶茶及嫩尖茶样品: 湖北金莓科技发展有限公 司生产, 其中树莓叶茶样品为 2 个批次; 绿茶炒青(特级, 南京溧水生产)。 鞣花酸标准品(98%)、没食子酸标准品(99%)、芦丁标 准品(99%)、福林酚(2 mol/L)(上海 Sigma 公司); 乙醇、甲 醇(色谱纯)、三氯化铝、丙酮、浓盐酸、碳酸钠、浓硫酸、 醋酸-醋酸钠缓冲液、过硫酸钾、蒽酮、1, 1-二苯基-2-三硝 基苯肼(DPPH 溶液)、2, 2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸) 二铵盐(ABTS 溶液) (分析纯, 上海 Sigma 公司) EX–200A 型电子天平(慈溪天东衡器厂); 759 型紫外 可见分光光度计(上海菁华科技有限公司); PL–5–B 型低速 离心机(上海安亭科学仪器厂); KQ-100DE 数控超声波清洗 仪(昆山超声仪器有限公司)。 

实验方法

总黄酮含量测定

(1) 样品处理 准确称取 0.50 g 干燥并研碎的茶叶于锥形瓶中, 按 1:80(m:V, g/mL)的料液比, 加入 40 mL 50%乙醇溶液, 70 ℃水浴回流提取 5 h, 滤纸过滤, 残渣用 8 mL 50%乙醇 洗涤, 定容至 50 mL 备用。 

(2) 标准曲线 精密称取芦丁标准品 16.8 mg, 用 50%的乙醇溶液溶 解, 定容至 50 mL, 分别吸取上述芦丁标准液 160、200、 240、280、320、360 L 至 10 mL 试管中, 加水补至 2.6 mL, 加入 1.5%AlCl3 1.6 mL 和 pH 5.4 的醋酸-醋酸钠缓冲液0.8 mL, 摇匀, 室温避光静置 30 min, 于 415 nm 下测定其 吸光度值, 以吸光度值为纵坐标, 芦丁的含量(mg)为横坐 标, 绘制标准曲线。 

(3) 样品的测定 吸取样品液 400 L 进行测定。方法同 2.2.1(2), 根据 回归方程计算总黄酮含量(mg/g, 以芦丁计)。 

总多酚含量测定 

(1) 样品处理 方法同 2.2.1(1)。 

(2) 标准曲线 准确称取 17.0 mg 没食子酸, 用纯净水溶解, 定容至 10 mL, 混匀, 稀释 3 倍后备用。分别移取 40、60、80、100、 120、140 L 至 10 mL 试管中, 加水补至 500 L, 再加入 2.5 mL 0.2 mol/L 福林酚试剂混合, 在 0.5~8 min 内加入 2 mL 7.5%碳酸钠溶液, 充分混合。将上述混合标准溶液在 室温下避光放置 60 min 后, 在 765 nm 波长下测定吸光值。 以吸光度值为纵坐标, 没食子酸浓度(mg/mL)为横坐标, 绘制标准曲线。 

(3) 样品的测定 将样品液稀释适当的倍数(5~10)进行测定。方法同 2.2.1(2), 根据回归方程计算总多酚含量(mg/g, 以没食子 酸计)。 

鞣花酸含量测定

(1) 样品处理 精确称取树莓叶茶 0.50 g, 加 入 50%甲醇溶液 100 mL(内含 1 mL 浓 HCl 及 0.2 g Vc), 浸提 12 h, 然后 90 ℃回流 3 h, 过滤, 残渣用 10 mL 甲醇洗涤, 滤液 60 ℃ 减压浓缩至干, 残渣用色谱纯甲醇溶解, 定容至 25 mL 容 量瓶中。经 0.45 μm 的微孔膜过滤备用。 

(2) 色谱条件 柱型号: Inertsil ODS-SP-C18 柱(4.6 mm×250 mm, 5 µm); 柱温: 30 ℃; 流速: 1 mL/min; 检测波长 254 nm; 梯度洗脱程序: A 为甲醇, B 为 1%乙酸水: 0~25 min, 50%A; 25~30 min, 50%~60%A; 35~36 min, 60%~100%A; 36~ 45 min, 100%A; 45~50 min, 50%A; 进样体积 10 μL. 

(3) 标准曲线 精密称取鞣花酸标准品 0.95 mg 于 10 mL 容量瓶中, 用色谱纯甲醇溶解, 超声 5 min, 冷却至室温, 定容至刻度, 摇匀。经 0.45 μm 的微孔膜过滤, 制成 0.095 mg/mL 的标 准品溶液。按色谱条件对鞣花酸标准品溶液进行检测, 以 鞣花酸质量(μg)为横坐标, 峰面积为纵坐标, 绘制标准曲 线。根据标准曲线计算样品鞣花酸含量。 

抗氧化活性测定 

清除 ABTS 自由基活性测定 配制 2 mL 7 mmol/L 的 ABTS 溶液, 吸取 35 μL 140 mmol/L 的过硫酸钾溶液至 ABTS 溶液中, 室温避光放 置 12~16 h, 形成 ABTS 储备液。将 ABTS 储备液用超纯水稀释约 120 倍即为 ABTS 工作液, 酶标仪测定其 734 nm 下 的吸光度值为 0.550。取 2.2.1 的备用样液稀释 25~100 倍, 在 96 孔板中, 分别加入稀释后的样品液 5、10、15、20 μL, 用超纯水补至每孔 50 μL, 然后再加入 200 μL ABTS 工作 液, 反应体系 250 μL, 振荡混匀, 30 min 后测定其 734 nm 下的吸光度(Ai); 取 50 μL 50%乙醇溶液代替样品溶液测得 空白吸光度(AC); 以 200 μL 超纯水代替 ABTS 混合液测得 样品本底吸光度(Aj), 按公式(1)计算样品的清除率, 并根 据不同浓度样品清除率的曲线计算 IC50 值。

总多酚标准曲线如图 1, 由图可知, 总多酚含量 X(以 没食子酸计)与 765 nm 下的吸光度值 Y 的回归方程为 Y=10.796X+0.0232, r 2 =0.9993, 表明没食子酸浓度在 0~0.159 mg/mL 范围内线性良好。

树莓嫩尖茶清除 DPPH 自由基的活 性最强, 半数有效浓度仅为 69.3 μg/mL 其次为特级炒青, 2 个树莓叶茶样品清除 DPPH 自由基的活性相近, 均显著低 于树莓嫩尖茶, 半数有效浓度为树莓嫩尖茶的 5.4 倍。特 级炒青清除 ABTS 自由基的活性最强, 半数有效浓度仅为 8.41 μg/mL, 其次为树莓嫩尖茶, 树莓叶茶清除 ABTS 自 由基的活性较低, 半数有效浓度为树莓嫩尖茶的 11~12 倍。这可能主要是由于不同种类茶叶的多酚含量决定的。

树莓叶茶和嫩尖茶的鞣花酸含量较为丰富, 最高达 26.75 mg/g, 是特级炒青 6.8 倍以上。树莓叶茶和嫩尖茶的总黄酮含量达 18~22 mg/g, 也略高于绿茶特级炒青 (16.44 mg/g)。树莓嫩尖茶的总多酚含量同特级炒青接近, 均超过 180 mg/g。树莓叶茶的总多酚含量较低, 仅为绿茶 和树莓嫩尖茶 36~39%。

免责声明：文章仅供学习和交流，如涉及作品版权问题需要我方删除，请联系我们，我们会在第一时间进行处理。