检测红枣中４种链格孢霉毒素（KQ-600DE使用）

链格孢菌是在自然界中广泛分布的一种常见植 物病原真菌和腐生真菌，它会破坏农作物，导致采后 腐烂。贮藏期间水果蔬菜的大量腐烂与链格孢菌在 低温下生长良好有关，许多蔬菜水果很容易产生链 格孢菌。目前关于链格孢菌毒素检测的标准，只 有ＳＮ／Ｔ４２５９－２０１５《出口水果蔬菜中链格孢菌毒素 的测定液相色谱－质谱／质谱法》标准，且链格孢菌 毒素的检出 限 为１０μｇ／ｋｇ。而关于链格孢菌毒素 的限量规定则未见报道。

１ 实验部分 

１．１ 试剂与仪器 

乙腈、甲 醇 （ＨＰＬＣ 纯），美 国 Ｆｉｓｈｅｒ公 司；甲 酸、ＮａＣｌ（ＨＰＬＣ纯），德国 ＣＮＷ 公司；十八烷基三 氯硅烷（Ｃ１８）吸 附 剂 （４０～６３μｍ），德 国 ＣＮＷ 公 司；Ｎ－丙基乙二胺（ＰＳＡ）吸附剂（４０～６３μｍ），德国 ＣＮＷ 公司；石 墨 化 碳 墨 （ＧＣＢ）吸 附 剂 （３８～１２５ μｍ），德国 ＣＮＷ 公 司；腾 毒 素（Ｔｅｎ）、链 格 孢 霉 素（ＡＬＴ）、链 格 孢 酚 甲 基 乙 醚 （ＡＭＥ）、链 格 孢 酚 （ＡＯＨ）４种 ＡＴｓ标准品（质量分数＞９９．５％），德 国 Ｄｒ．Ｅ公司；红枣样品（来源于新疆地区不同生产 基地、农贸市 场 和 超 市），样 品 去 果 核 后，经 匀 浆 后 －１８ ℃冷冻保存备用。 ＷａｔｅｒｓＸＥＶＯＴＱ－Ｓ超 高 效 液 相 色 谱－串 联 质 谱仪，美国 Ｗａｔｅｒｓ公司；ＭＳ３－ｂａｓｉｃ型漩涡混合器， 德国ＩＫＡ 公司；Ｓｉｇｍａ３－３０ｋ型离心机，德国 Ｓｉｇｍａ 公司；Ｎ－ＥＶＡＰＴＭ１１２ 型 氮 吹 仪，美 国 Ｏｒｇａｎｏｍａ－ ｔｉｏｎ公司；昆山舒美KQ-600DE 型 超 声 波 清 洗 器，江 苏 昆 山 市超声仪器公司；ＵＬＰＨＷ－ＩＶ 型超纯水机，四川优 普超纯科技有限公司。 

１．２ 实验 

１．２．１ 标准溶液的配制

 分别称取２ｍｇ链 格 孢 酚 甲 基 乙 醚 （ＡＭＥ）、１ ｍｇ腾毒 素（Ｔｅｎ）、０．５ ｍｇ 链 格 孢 霉 素 （ＡＬＴ）、１０ ｍｇ链格孢酚（ＡＯＨ）４种 ＡＴｓ标准品，用乙腈配成 各１０ ｍＬ 质 量 浓 度 分 别 为 ２００ ｍｇ／Ｌ ＡＭＥ、１００ ｍｇ／ＬＴｅｎ、５０ｍｇ／ＬＡＬＴ、１０００ｍｇ／ＬＡＯＨ 的单 个 标 准 储 备 液，－１８ ℃ 保 存。 分 别 取 ０．５ ｍＬ ＡＭＥ、１ｍＬＴｅｎ、２ｍＬＡＬＴ、０．１ｍＬＡＯＨ 的单个 标准储备液，用乙腈定容至１０ｍＬ，配制成质量浓度 为１０ｍｇ／Ｌ的混合标准液。 

１．２．２ 超高效液相色谱－串联质谱法（ＵＰＬＣ－ＭＳ／ ＭＳ）检测条件

ＬＣ条件：ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣＢＥＨ Ｃ１８ 色谱柱（１００ｍｍ×２．１ｍｍ，１．７μｍ）；流动相：体积分数为 ０．１％甲酸水溶液∶Ｂ 乙腈。梯度洗脱程序：０．０～ ０．５０ｍｉｎ（体 积 分 数 为 ９５％ 甲 酸 水 溶 液），０．５０～ ５．００ｍｉｎ （体 积 分 数 为 ９５％ ～５％ 甲 酸 水 溶 液）， ５．００ｍｉｎ （体 积 分 数 为９５％甲 酸 水 溶 液）；流 速 为 ０．４ｍＬ／ｍｉｎ；柱温箱为３０ ℃；进样体积为５μＬ。 ＭＳ条件：电 喷 雾 离 子 源（ＥＳＩ），正 离 子 和 多 反 应监测（ＭＲＭ）模式，离子源温度为１５０ ℃，脱溶剂 气流速为８００Ｌ／ｈ，锥孔气流速为５０Ｌ／ｈ，氩气作为 碰撞气，４种 ＡＴｓ的监测离子对及锥孔电压等质谱 参数见表１。

２ 结果与分析

定容溶剂是影响质谱分析过程中目标分析物离 子化效率和峰形的重要因素之一。结合分析物的结 构性质和流动相体系特点，本实验选取水和乙腈作 为定容溶剂，考察了不同水和乙腈体积比作为定容 溶剂对４种 ＡＴｓ响应和峰形的影响。当水和乙腈体积 比 为 ６０∶４０ 时，ＡＭＥ 和 ＡＯＨ 组分在质谱上没有响应；当水和乙 腈体积比为４０∶６０时，Ｔｅｎ、ＡＬＴ、ＡＭＥ和 ＡＯＨ４ 种 ＡＴｓ峰型对称性差，且均出现峰前 伸 的 现 象；当水和 乙 腈 体 积 比 为５０∶５０时，４种 ＡＴｓ 峰型对称性好，且 响 应 较 高。而 ＧＣＢ 吸 附 剂 对 ＡＭＥ 和 ＡＯＨ 组分有较强吸附作用，回收率相对较差 （低于４０％）。通 过 比 较 Ｃ１８和 ＰＳＡ 吸 附 剂 对４种 ＡＴｓ的净化效率发现，当吸附剂用量为１５０ｍｇ时， 两种吸 附 剂 对 Ｔｅｎ、ＡＬＴ 和 ＡＭＥ 的 回 收 率 均 在 ８０％以上，而 对 于 ＡＯＨ 组 分 的 净 化 效 果，Ｃ１８吸 附 剂要明显高于 ＰＳＡ 吸附剂。因此本实验选取 Ｃ１８用 量为１５０ｍｇ作为净化条件。

３ 结论 

建立了同时测定红枣中 Ｔｅｎ、ＡＯＨ、ＡＭＥ 和 ＡＬＴ４种 ＡＴｓ超 高 效 液 相 色 谱－串联质谱分析方 法。红枣样品经甲酸乙腈提取，ＱｕＥＣｈＥＲＳ方法净 化，采用 ＢＥＨ Ｃ１８色 谱 柱 分 离，体 积 分 数 为０．１％ 甲酸－水和乙腈作为流动相梯度洗脱，４种 ＡＴｓ有较 好的响应和峰形。同时，通过基质匹配外标法定量， 有效地减少了基质效应，提高了定量的准确性。经 方法学验证，表明该方法的线性范围、检出限、定量 限、准确度和精密度等均满足残留检测方法确认的 要求，适用于红枣中４种 ＡＴｓ的定性定量检测。

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