用昆山舒美KQ-500DV对白芍饮片的指纹图谱建立

1 材料 

1.1 仪器 

UltiMate 3000型HPLC仪，包括U3000型二极管阵 列检测器、version 7 Chromatogram 化学工作站（美国 Thermo Fisher公司）；600型HPLC仪，包括2487型紫外 检测器、version 2 Empower 化学工作站（美国 Waters 公 司）；KQ-500 SV型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BT25S型十万分之一天平、BSA224S-CW型万分 之一天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]。 

1.2 药品与试剂

芍药苷对照品（批号：MUST-16041901，纯度：≥ 98.5％）、芍药内酯苷对照品（批号：MUST-16051601，纯 度：≥98.5％）、1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖对照品（批 号：MUST-16061211，纯度：≥98.5％）、儿茶素对照品（批 号：MUST-16030812，纯度：≥98％）均由成都曼斯特生 物 科 技 有 限 公 司 提 供 ；没 食 子 酸 对 照 品（批 号 ： PS-0258-0050，纯度：98.5％）、苯甲酰芍药苷对照品（批 号：PS-13011802，纯度：98.5％）、丹皮酚新苷对照品（批 号：PS-08080102，纯度：≥98％）均由成都普斯生物科技 有限公司提供；乙腈、甲醇均为色谱纯，磷酸为分析纯， 水为超纯水。 

1.3 药材 

白芍药材（编号：S1～S26）经河南中医药大学药学 院张振凌教授鉴定为毛茛科植物芍药（Paeonia Lactiflora Pall.）的干燥根，并按2015年版《中国药典》（四部） “炮制”通则制成饮片；白芍饮片（编号：B1～B10，中试生产）、炒白芍饮片（编号：C1～C10）、酒白芍饮片（编 号：J1～J10）均由安徽亳州市沪谯药业有限公司提供（中 试生产是指按国家中药标准化项目要求，将实验室工艺 在合作企业进行工艺放大生产，以满足企业生产的要 求）。样品信息详见表1。

2 方法与结果 

2.1 色谱条件 

色谱柱：SunFire® C18（250 mm× 4.6 mm，5 µm）；流 动相：乙腈（A）-0.05％磷酸水溶液（B），梯度洗脱（0～10 min，8％A→18％A；10～25 min，18％A→20％A；25～ 30 min，20％ A；30～40 min，20％ A→25％ A；40～55 min，25％A →40％A；55～60 min，40％A→45％A；60～ 70 min，45％A→8％A）；采集时间：70 min；进样量：15 µL；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：230 nm。 

2.2 溶液的制备 

2.2.1 混合对照品溶液 

精密称取没食子酸对照品 14.08 mg、儿茶素对照品 10.90 mg、芍药内酯苷对照品 6.76 mg、芍药苷对照品 11.52 mg、丹皮酚新苷对照品 10.51 mg、1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖对照品 10.33 mg、苯甲酰芍药苷对照品10.99 mg，分别置于10 mL量 瓶中，加甲醇溶解并定容，得各单一对照品溶液。分别 精密量取各单一对照品溶液1 mL，置于同一25 mL量瓶 中，加甲醇至刻度，即得混合对照品溶液。 

2.2.2 供试品溶液 

精密称取白芍中粉（中粉指能全部 通过四号筛，但混有不超过60％能通过五号筛的粉末） 0.1 g，置于 50 mL 量瓶中，加 50％乙醇 35 mL，超声（功 率：500 W，频率：50 Hz）处理30 min，放冷，加50％乙醇 至刻度，摇匀，经 0.22 µm 微孔滤膜滤过，取续滤液， 即得。 

2.3 方法学考察

取“2.2.2”项下供试品溶液（编号： S10）适量，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，以 芍药苷峰的保留时间和峰面积为参照，记录各共有峰的 相对保留时间和相对峰面积。结果，9个共有峰相对保 留时间的RSD均小于0.19％（n＝6），相对峰面积的RSD 均小于2.34％（n＝ 6），表明本方法精密度良好。取“2.2.2”项下供试品溶液（编号： S10）适量，分别于室温下放置 0、2、4、8、12、24 h 时按 “2.1”项下色谱条件进样测定，以芍药苷峰的保留时间和峰面积为参照，记录各共有峰的相对保留时间和相对峰 面积。

3 讨论

前期对液相条件进行了优化，发现以乙 腈-0.05％磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱时，各成分 的分离效果较好，保留时间适当，峰形良好。同时，采用 二极管阵列检测器在190～400 nm波长内进行扫描，得 三维光谱图。结果显示，检测波长为214 nm时，1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖、没食子酸峰有最大吸收，但峰 形较差，基线波动较大，对样品峰面积的积分影响大；当 检测波长为230 nm时，芍药苷峰有最大吸收，且色谱峰 形较好，出峰数目较多，各色谱峰之间分离度较好，基线 平稳，故选择230 nm为检测波长。

免责声明：文章仅供学习和交流，如涉及作品版权问题需要我方删除，请联系我们，我们会在第一时间进行处理。