测多评法评价清肠通腹颗粒的质量(KQ-250D使用)

清肠通腹颗粒由大黄、党参、桃仁、白术、木 香、厚朴、炒枳壳、赤芍、火麻仁 9 味中药组成， 具有健脾益气、行气通腑、活血止痛之功效。临床 用于治疗腹部手术后引起的正气损伤、脾失健运、 胃纳失职、气滞血瘀、腑气不通等症效果显著。清 肠通腹颗粒由 9 味中药提取而成，其疗效是多组分 共同作用的结果，单一成分的含量测定无法全面、 真实地评价其整体质量。王智民等率先提出一测 多评法（QAMS），即利用中药及复方制剂中的一种成 分的标准品作为内参物，建立该成分与其他成分之 间的相对校正因子，通过相对校正因子计算其他成 分含量，来实现多个成分的同步测定，具有快速、 简便、成本低等优点，近年来在中药复方制剂质量 评价中逐渐得以推广应用 。

1 仪器与材料 

1.1 仪器 

Shimadzu LC-2010AHT 高效液相色谱系统 （日本岛津公司），Agilent 1220 液相色谱仪系统（美 国安捷伦公司）；色谱柱：Agilent HC-C18（4.6 mm × 250 mm，5 μm），UItisiIAQ-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；BS210S 万分之一分析天平（德国 Sartorious 公 司）；昆山舒美KQ-250DA 型数控超声仪（昆山市超声仪器有限 公司）；R206B 型旋转蒸发仪（上海申生技术有限公 司）。

 1.2 材料

 10 批清肠通腹颗粒，参考方法制备 （批 号 ： 20180401~20180410， 每 袋 5 g）； 大 黄 素 （中国药品生物制品检定所，批号 110756-200110， 纯度≥98%）；和厚朴酚、厚朴酚、柚皮苷（宝鸡市辰 光 生 物 科 技 有 限 公 司 ， 批 号 ： HH041230198、 HM041231198、HN206558198，纯度≥98%）；氧化芍 药苷、芍药苷（上海金穗生物科技有限公司，批号： 20141015，20140722，纯度≥98%）；甲醇、乙腈为色 谱纯，磷酸为分析纯。

2 方法与结果

 2.1 定量测定分析方法学验证 

2.1.1 色谱条件 

色谱柱为 Agilent HC-C18和 UltisilAQC18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.1% 磷酸水溶液，梯度洗脱（0~15 min，15% 乙腈；15~ 40 min，15%~38% 乙腈；40~50 min，38%~55% 乙 腈；50~65 min，55%~70% 乙腈）；体积流量：1.0 mL·min-1 ；检测波长：230 nm；柱温：25 ℃；进样 量：10 μL。标准品及供试品 HPLC 图谱见图 1，结 果显示各化合物之间分离度良好。 

2.1.2 混合标准品溶液的制备

 分别精密称取氧化芍 药苷、芍药苷、柚皮苷、和厚朴酚、大黄素、厚 朴酚标准品适量，分别置于 10 mL 容量瓶中，加 甲醇定容至刻度，摇匀，得到单一标准品储备液， 其质量浓度分别为：氧化芍药苷 0.58 mg·mL-1 、芍药 苷 0.53 mg·mL-1 、柚皮苷 0.53 mg·mL-1 、和厚朴酚 0.86 mg ·mL-1 、大黄素 0.41 mg ·mL-1 、厚朴酚 0.75 mg·mL-1 。 精密吸取标准品储备液混合，加甲醇定容，配制 成含氧化芍药苷 69.6 μg·mL-1 、芍药苷 74.2 μg·mL-1 、柚 皮苷 58.3 μg·mL-1 、和厚朴酚 60.2 μg·mL-1 、大黄素 61.5 μg·mL-1 、厚朴酚 60 μg·mL-1 的混合标准品母 液，再精密吸取 1、2、3、5、8 mL 至 10 mL 容量瓶 中，加甲醇混合，定容，摇匀，制成一系列质量浓 度的混合标准品溶液，4 ℃冰箱保存。 

2.1.3 供试品溶液的制备

 精密称取清肠通腹颗粒 0.5 g，置于 10 mL 容量瓶中，加入甲醇至刻度，常 温超声溶解 30 min；加甲醇补足至刻度，摇匀，滤 过，取续滤液过 0.45 μm 微孔滤膜，即得。 

2.1.4 阴性溶液的制备

 按处方称取相应辅料，按工 艺制备成阴性样品，按 2.1.3 项下方法制备成阴性溶 液。各阴性对照组 HPLC 图谱见图 1，结果阴性对照 分别在氧化芍药苷、芍药苷、柚皮苷、和厚朴酚、 大黄素、厚朴酚相应的保留时间处无干扰。 

2.1.5 线性关系的考察 

分别精密吸取一系列混合标 准品溶液各 10 μL 进样，按 2.1.1 项下的色谱条件进 行测定。记录相应的色谱峰面积，以各成分峰面积为纵坐标（Y），对照品质量浓度为横坐标（X），进行 线性回归，回归方程见表 1。结果显示，各成分标准 曲线在线性范围内线性关系良好。

2.1.6 精密度试验 

取 20180401 批清肠通腹颗粒， 按 2.1.3 项下的方法进行供试品溶液制备，按 2.1.1 项下的色谱条件，同 1 d 内连续进样 6 次，记录峰面 积。结果，氧化芍药苷、芍药苷、柚皮苷、和厚朴 酚、大黄素及厚朴酚的日内精密度分别为 2.82%、 0.15%、4.12%、3.24% 、4.05% 及 4.07%。以芍药苷 为参照峰，共有峰的相对保留时间和峰面积比值基本 一致，其 RSD 均小于 5.0%，相似度均在 0.95 以上， 符合指纹图谱的技术要求，表明仪器精密度良好。

 2.1.7 稳定性试验 

取批号为 20180401 的清肠通腹颗粒，制备供试品溶液，分别于制备后 0、2、4、8、 12、24 h 进样检测，记录色谱峰面积。结果氧化芍 药苷、芍药苷、柚皮苷、和厚朴酚、大黄素、厚朴 酚 的 峰 面 积 RSD 分 别 为 0.99%、 1.19%、 0.74%、 2.42%、1.51%、2.29%。以芍药苷的保留时间和峰面 积为参照，各共有峰的相对保留时间和峰面积比值 基本一致，其 RSD 均小于 3.0%，相似度均在 0.95 以上，符合指纹图谱的技术要求，表明供试液在 24 h 内稳定。

3 讨论 

清肠通腹颗粒由大黄、芍药等 9 味药材组成，其 中大黄具有清热泻火、凉血解毒、逐瘀通经、利湿 退黄之功效，为方中君药；芍药具有养血敛阴、平 抑肝阳、柔肝止痛的功效，炒枳壳具有理气宽中、 行滞消胀的功效，厚朴具有健胃消食、下气宽中、燥湿消痰的作用 ，共为臣药。因此，选用这 4 味中 药进行含量测定。

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