和刺激诱导大鼠的抗抑郁作用

抑郁症是一种以情绪持续低落超过两周、思维 和行为发生改变为主要特征，严重影响正常生活的 精神疾病。虽然现代医学对抑郁症有广泛深入的 研究，但其具体的病因和发病机制仍不明确。近年 来有学者提出了“神经营养假说”，认为抑郁症的发 生与脑源性神经营养因子（BDNF）及其信号通路 密切相关。当前抗抑郁的药物大部分是合成药， 普遍存在起效慢、有效率不高、价格昂贵、不良反 应多等缺点，制约了临床使用。因此安全、低毒的 天然药物成了抗抑郁药研究领域的研究热点。

1 材料

1.1 实验动物

Sprague-Dawley（SD）大鼠，清洁级，雄性， 50 只，180～220 g，由浙江省实验动物中心提供， 合格证号为 SCXK（浙）2014-0001。

1.2 药物与试剂

吴茱萸次碱，质量分数为 98%，购自杭州东岸生 物医药有限公司；氟西汀片，规格 10 mg/片，产品批 号 171201，购自常州四药制药有限公司；羟甲基纤维 素钠，产品批号 950420，购自国药集团化学试剂有限 公司；5-羟色胺（5-HT）和去甲肾上腺素（NA）酶联 免疫吸附测定试剂盒，产品批号 AK0017NOV25019， 购自 Elabscience 公司；PCR 引物购自上海捷瑞生物 工程有限公司；qPCR 逆转录试剂盒，产品批号 RR036A，购自宝生物工程（大连）有限公司。

1.3 仪器

分析天平由上海民侨精密仪器公司提供；酶标 仪由 Thermo Fisher 提供；恒温水浴超声仪由昆山超声仪有限公司提供。

2 方法

2.1 分组及给药

实验开始前大鼠在实验室适应性饲养一周，以适应环境。适应性饲养结束后大鼠进行旷场实验 （open-field test），根据得分将 50 只大鼠随机分为 5 组：对照组、模型组（0.5% CMC-Na 溶液）、吴茱 萸次碱低剂量组（10 mg/kg）、吴茱萸次碱高剂量组 （20 mg/kg）、氟西汀组（1 mg/kg）。吴茱萸次碱 的剂量是通过预实验确定的；氟西汀剂量根据人的 剂量换算成大鼠的剂量，文献显示一般人的剂量是 20 mg/d（按 70 kg/人，200 g/鼠），人鼠换算系数为 0.018，算得鼠的剂量为 1.8 mg/kg，前期按这个剂 量做了预实验，发现连续给药 2～4 周后鼠的耐受性 较差，故调整为 1 mg/kg 给药。除对照组外，模型 组及各给药组于造模的第 15 天开始，每天一次 ig 给药，完成后 1 h，继续进行慢性不可预见性刺激抑 郁造模刺激，连续 14 d 直至实验结束。室温（22± 2）℃，大鼠自由摄食饮水，光照节律为 12 h（8:00～ 20:00）。

2.2 大鼠慢性不可预见性刺激抑郁模型的建立

参照文献的方法加以改进，建立大鼠抑郁模 型：大鼠在 28 d 实验期内接受 7 种不同的刺激，分 别为：禁食（24 h），禁水（24 h），夹尾（1 min）， 鼠笼摇晃（5 min），潮湿饲养（12 h），冰水游泳（5 min）， 昼夜颠倒。每天一种刺激，同种刺激不连续出现。

2.3 体质量检测

分别于造模第 1、14、28 天称取大鼠体质量。

2.4 糖水偏好实验

糖水消耗实验在模型组造模两周后（第 14 天） 和给药两周后（第 28 天）进行。实验开始前先训练 大鼠饮用 1%糖水 24 h，然后再给予蒸馏水 24 h， 训练期间正常饮食。训练结束后禁食禁水 12 h，同 时给予大鼠 1%糖水一瓶和蒸馏水一瓶，24 h 后称 量记录糖水消耗量和蒸馏水消耗量。 糖水偏好度＝糖水消耗量/（糖水消耗量＋蒸馏水消 耗量）

2.5 旷场实验旷场

实验在模型组造模两周后（第 14 天）和给 药两周后（第 28 天）进行。实验室旷场箱为高 100 cm， 宽 100 cm，高 40 cm 的木质箱，底面为黑色，四周 为白色，通过 Anymaze 视频追踪软件将底面划分为 25 个小方格。实验进行时室内保持安静，将大鼠缓 慢放至中央格，观察并记录 5 min 内大鼠穿越的格 数和中央格停留时间。每只大鼠实验过后将木箱底 部清理干净，并用酒精棉擦拭底部，以保证下只大 鼠实验时不受粪便气味等因素的影响。

3 结果

3.1 吴茱萸次碱对大鼠体质量的影响

体质量变化能够反映抑郁模型建立是否成功。 第 14 天应激刺激后，对照组大鼠体质量增长较快， 与模型组相比有显著性差异（P＜0.05），表明建模 成功。与模型组比较，在第 28 天，氟西汀组和吴茱 萸次碱高低剂量组均能显著抑制大鼠体质量下降 （P＜0.05），吴茱萸次碱高剂量组与氟西汀组没有显 著性差异，说明吴茱萸次碱能够改善抑郁大鼠的食 欲，增加进食量，保持体质量增长，改善抑郁症状。

3.2 吴茱萸次碱对大鼠糖水偏好度的影响

与对照组比较，在第 14 天，模型组大鼠的糖水 偏好度明显降低（P＜0.05）。与模型组比较，在第28 天，氟西汀组和吴茱萸次碱高剂量组大鼠的糖水 偏好度明显增加（P＜0.05），吴茱萸次碱高剂量组 与氟西汀组没有显著性差异。

3.3 吴茱萸次碱对大鼠在旷场实验中行为的影响

与对照组比较，在第 14 天，模型组大鼠穿越格 数和中央格停留时间明显减少（P＜0.05）。与模型 组比较，在第 28 天，氟西汀组和吴茱萸次碱高剂量 组大鼠穿越格数和中央格停留时间明显增加（P＜ 0.05），吴茱萸次碱高剂量组与氟西汀组没有显著性 差异。

4 讨论

昆山舒美认为目前，抑郁症模型可以分为环境刺激模型、社 会刺激模型、药物诱导模型、转基因模型、手术制 备模型和产后抑郁模型 6 大类。本研究所选取的模型就属于环境刺激模型，是抑郁症的经典慢性模型 之一，利用长期的相对温和的不可预测的人为刺激 使动物产生抑郁样行为，其病因和病理机制接近于 人类抑郁症，目前已经被广泛接受并运用于抗抑郁 药物研究。本实验通过检测大鼠体质量、蔗糖 偏爱度和旷场实验等，判断慢性应激抑郁模型建立 成功与否，观察吴茱萸次碱对大鼠抑郁行为的影响。 结果表明吴茱萸次碱能明显改善大鼠抑郁样行为， 高剂量（20 mg/kg）效果较好，与阳性药氟西汀的作用相当。



 

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