测定酵素食品中的匹可硫酸钠(KQ500DE使用)

酵素及酵素食品来自日本天然健康的食品概 念，国内引用其调节新陈代谢的功能，宣称酵素食品 具有通便减肥的功效。网络上酵素食品主要有 果冻、糖果、蜜饯和饮料等，经发展已成为新兴的畅 销减肥产品。由于市场利润巨大，减肥类非法添加 药物层出不穷。2019 年初，本实验室对宣称通 便减肥的酵素食品进行风险监测，检出一种减肥类 非添新成分，经确证为“匹可硫酸钠”。

1 实验部分

1．1 仪器、试剂与材料

ＬＣ－20ＡＤＸＲ 高效液相色谱仪 （日本岛津公 司）；Ｔｒｉｐｌｅ Ｑｕａｄ 5500 三重四极杆串联质谱仪（配 ＥＳＩ）（美国 Ｓｃｉｅｘ 公司）；涡旋振荡器（德国 ＩＫＡ 公 司）；恒温水浴箱（德国 Ｊｕｌａｂｏ 公司）；昆山舒美KQ-500DE超声提取器 （昆山市超声仪器有限公司）；固相萃取装置（美瑞泰克科技有限公司）；超纯水机 （美 国 Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ 公司） 匹可硫酸钠标准品（纯度 96％，加拿大 ＴＲＣ公 司）；乙腈、甲醇（色谱纯，美国 Ｈｏｌｌｙ 公司）；乙酸 铵、氨水（含量 25％ ～28％）、无水乙醇、三氯乙酸（分 析纯，广州化学试剂厂）；聚酰胺柱 （1 000 ｍｇ ／ 6 ｍＬ，美国 Ｔｈｅｒｍｏ 公司）。氨水－70％ 乙醇混合溶液： 量取 100 ｍＬ 氨水与 900 ｍＬ 70％ （ｖ ／ ｖ）乙醇水溶液 混匀。1％ 三氯乙酸溶液：称取 10 ｇ 三氯乙酸溶于 1 000 ｍＬ 水中。 152 批次酵素食品收集于风险监测任务、飞行 检查和科研网购。提取考察实验用样品采用阴性样 配制，均一化称量后，果冻、软糖高温熔融时加入少 量标液，放冷备用；蜜饯、固体饮料加入少量标液，放 置半小时后备用。

1．2 标准溶液的配制

准确称取 10 ｍｇ 匹可硫酸钠标准品，用水配成 1 000 ｍｇ ／ Ｌ 的标准储备液，4 ℃下保存 3 个月。准 确量取适量标准储备液，用水配成 5 ｍｇ ／ Ｌ 的标准 使用液，4 ℃下保存 2 周。取适量标准使用液，用水 配成匹可硫酸钠质量浓度为 5 ～ 500 μｇ ／ Ｌ 的标准曲 线溶液，临用新配。

1．3 样品前处理

1．3．1 提取

取适量样品，采用捣碎、剪碎、研磨等方式充分 粉碎或混合均匀后备用。 果冻、软糖：准确称取 1 ｇ 样品于 50 ｍＬ 离心管 中，加入 40 ｍＬ 水，80 ℃下水浴至样品溶解，取出放 冷至室温，转移至 50 ｍＬ 容量瓶，用 5 ｍＬ 水洗涤离 心管，洗涤液并入同一容量瓶，加入 5 ｍＬ 1％ 三氯乙 酸溶液，用水定容至 50 ｍＬ，待净化。 蜜饯：准确称取 1 ｇ 样品于 50 ｍＬ 离心管中，加 入 40 ｍＬ 水，超声提取 20 ｍｉｎ，提取液和残渣转移 至 50 ｍＬ 比色管，用 5 ｍＬ 水洗涤离心管，洗涤液并 入同一比色管，加入 5 ｍＬ 1％ 三氯乙酸溶液，用水定 容至 50 ｍＬ，待净化。 固体饮料：准确称取 1 ｇ 样品于 50 ｍＬ 离心管 中，加入 25 ｍＬ 水，涡旋分散，80 ℃下水浴 10 ｍｉｎ， 取出放冷至室温，8 000 ｒ ／ ｍｉｎ 下离心 5 ｍｉｎ，上清液 转移至 50 ｍＬ 容量瓶。加入 20 ｍＬ 水重复提取一 次，合并两次上清液。于上清液中加入 5 ｍＬ 1％ 三 氯乙酸溶液，用水定容至 50 ｍＬ，待净化。 若上述待净化液浑浊，可取适量在 8 000 ｒ ／ ｍｉｎ 下离心 5 ｍｉｎ，取上清液备用。

1．3．2 净化

用 10 ｍＬ 水预先活化聚酰胺柱。取 10 ｍＬ 待 净化液于柱内，待净化液流尽后，依次用 10 ｍＬ 水、 10 ｍＬ 70％ （ｖ ／ ｖ）甲醇水溶液洗涤，15 ｍＬ 氨水－ 70％ 乙醇混合溶液洗脱，收集洗脱液于 80 ℃下水浴 蒸发至近干，用水定容至 5 ｍＬ，过 0. 22 μｍ 微孔滤 膜，待测。若匹可硫酸钠浓度超出线性范围，可用水 适当稀释。

1．4 色谱－质谱条件

色谱柱：Ｔｈｅｒｍｏ Ａｃｃｕｃｏｒｅ ＲＰ－ＭＳ（100 ｍｍ× 2. 1 ｍｍ，2. 6 μｍ，美国 Ｔｈｅｒｍｏ 公司）；流速：0. 3 ｍＬ ／ ｍｉｎ，乙腈－10 ｍｍｏｌ ／ Ｌ 乙酸铵（15 ∶ 85，ｖ ／ ｖ）等 度洗脱。柱温 35 ℃，进样量 5 μＬ。 采用 ＥＳＩ 源，正离子扫描，多反应监测（ＭＲＭ） 模式检测；电喷雾电压 5 500 Ｖ，离子源温度 550 ℃； 雾化气压力：3. 447×105 Ｐａ，气帘气压力 2. 759×105 Ｐａ，碰撞气压力 6. 207×104 Ｐａ。匹可硫酸钠采集参 数：定量离子对 ｍ ／ ｚ 438. 2 ／ 183. 9，去簇电压（ＤＰ） 120 Ｖ，碰撞能（ＣＥ）40 Ｖ；定性离子对 ｍ ／ ｚ 438. 2 ／ 278. 2，ＤＰ 120 Ｖ，ＣＥ 28 Ｖ。

2 结果与讨论

匹可硫酸钠为新发现的非法添加成分，需进行 确证实 验。采 用 Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ 高 分 辨 质 谱 （美 国 Ｔｈｅｒｍｏ 公司）采集有证标准品和可疑样品中匹可 硫酸钠色谱峰的质谱信息。色谱图中，可疑样品检 出与标准品保留时间一致的色谱峰；一级质谱图中， 正离 子 模 式 下 标 准 品 母 离 子 精 确 质 量 数 为 438. 030 15，样品为 438. 030 18，两者质量偏差小于 0. 000 05；在二级图谱中有 3 个相同的碎片离子。 上述结果表明，两者为同一物质，检出成分确证为匹 可硫酸钠。匹可硫酸钠水溶性极好，宜采用水或与水混溶 的溶剂提取，选取水、甲醇和乙腈进行比对。参考果 冻、蜜饯、固体饮料常用的提取方式，选择水浴 和超声进行比较。提取溶剂与提取方式相互组合， 形成 6 种方式，考察对应的提取效果。 结果表明：
（1）采用水－水浴提取时，4 种基质的回收 率均大于 98％；
（2）含有乙腈的组合对各种基质提 取均不理想；
（3）甲醇对软糖的提取较差；
（4）果冻、 软糖、固体饮料采用水浴提取优于超声，蜜饯两者提 取的效果相当。分析原因，甲醇、乙腈使软糖变性、 固体饮料结块，导致目标物包埋，不利于提取。常温 下软糖、果冻溶解不完全，含淀粉、奶精的固体饮料 呈稀糊状，不利于目标物分散。进一步优化发现，蜜 饯在提取时已充分剪碎，被水浸泡存在吸水发胀问题，超声较水浴的发胀程度小，所以蜜饯更适于采用 超声提取。

3 结论

建立了高效液相色谱－串联质谱测定酵素 食品中匹可硫酸钠的方法。目标物采用水作为提取 溶剂，经水浴或超声提取，聚酰胺净化。方法的线性 范围、检出限、回收率和精密度满足非法添加检测要 求，特别适合果冻、软糖、蜜饯和固体饮料基质酵素 食品中匹可硫酸钠的定性、定量分析，灵敏度高、抗 干扰能力强，准确可靠。该方法能弥补现时酵素食 品中匹可硫酸钠的检测空白，有一定的实用意义。



 

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