测定黄芪叶中4种成分的含量（KQ500DB使用）

膜荚 黄 芪 Astragalusmembranaceus（Fish.）Bge. 为豆科（Leguminosae）黄芪属（Astragalus Linn）植物 的干燥根，始记载在《神农本草经》作为黄芪药 用，列为上品，味甘、性微温，归脾、肺经，具有补气升阳，行滞通痹，利水消肿，托毒排脓等的功效， 临床上常用于糖尿病、主要分布在甘肃、山西、黑龙江、内蒙古等地。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Waters-2695 型高效液相色谱仪，2998 型 PDA 检测器（美国 Waters 公司）；EYELA OSB-2200 型旋 转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）；ML104/02 型电子分析天平 （梅特勒-托利多上海有限公司）；昆山舒美KQ500DB 型超声仪器（昆山市超声仪器公司）。

1.2 材料

去氢二松柏醇-4-O-β-D-葡萄糖、鼠李柠檬素 3-O-β-D-葡萄糖苷、山奈酚 3-O-[6′′-O-（反式对-肉桂酰基）]-β-D-葡糖糖苷、鼠李柠檬素-3-Oβ -新橙皮糖苷对照品，均为实验室分离得到，鉴定 纯度均大于 98.0%；乙腈为色谱纯 （美国 Thermo fisher 科技有限公司）；水为屈臣氏蒸馏水；其余实 验用试剂均为分析纯。实验用 15 批膜荚黄芪叶药 材的样品信息见表 2，经黑龙江中医药大学王振月 教授鉴定为膜荚黄芪的干燥叶。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Sunfire C18（4.6mm×250mm, 5μm）；流动 相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（0 ~30min, 15%→ 45%A）；检测波长：266nm；流速为 1.0mL·min -1 ；柱 温：25℃；各化合物峰理论塔板数均大于 5000，峰 2 和 3 之间的分离度 R=2（tR3 -tR）2 （/ W2+W3 ）=2（19.82- 18.23）（/ 0.52+0.51）=1.54。混合对照品及膜荚黄芪 叶供试品溶液的 HPLC 色谱图见图 1。

2.2 混合对照品溶液的制备

精密称取各对照品适量，加甲醇定容，配制成 含有去氢二松柏醇-4-O-β-D-葡萄糖 0.1814mg·mL-1 、 鼠李柠檬素-3-O-β-新橙皮糖苷 0.2252mg·mL-1 、 山奈酚 3-O-[6′′-O-（反式-对-肉桂酰基）]-β-D葡糖糖苷 0.1596mg·mL-1 、鼠李柠檬素 3-O-β-D-葡 萄糖苷 0.4812mg·mL-1 的混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

称取适量膜荚黄芪叶粉碎，过 50 目筛，精密称 取其粉末 5.0g，置于 100mL 具塞锥形瓶中，加入甲 醇 50mL，称重，加热回流 2h，冷却后，再次称重，甲 醇补足减失重量，混匀过滤，减压回收甲醇，残渣用 甲醇溶解，转移至 10mL 容量瓶，加甲醇定容，摇匀， 即得供试品溶液。进样前用 0.22μm 微孔滤膜滤过。

3 讨论

3.1 波长的选择

通过 PDA 检测器，对混合对照品溶液在 190~ 400nm 处进行紫外全波长扫描，去氢二松柏醇-4- O-β-D-葡萄糖在 276nm 处有最大吸收，鼠李柠檬 素-3-O-β-新橙皮糖苷、山奈酚 3-O-[6′′-O-（反 式-对-肉桂酰基）]-β-D-葡糖糖苷在 271nm 处有 最大吸收，鼠李柠檬素 3-O-β-D-葡萄糖苷在 267nm 处有最大吸收，综合比较在 266，267，271，276，254， 300，365nm 各波长下峰强度、保留时间后，4 种化合 物在 266nm 波长下干扰较少，灵敏度高，选择 266nm 作为检测波长。

3.2 色谱条件的选择

试验考察了乙腈-水和甲醇-水分别作为流动相梯度洗脱，发现乙腈-水作为流动相较甲醇-水保 留时间稳定，色谱峰峰形较好，因此选择乙腈-水作 为流动相，梯度洗脱。试验选择 30min 的梯度洗脱 时间，使各色谱峰达到较好分离。 3.3 含量测定 膜荚黄芪叶富含黄酮类化合物。本试验以膜荚 黄芪叶 1 种木脂素类化合物和 3 种黄酮类化合物 为指标，运用 HPLC-PDA 法建立其含量测定，试验中选取黑龙江和内蒙古不同产地不同批次的膜荚 黄芪叶样品，研究结果显示黑龙江不同产地和批次 的膜荚黄芪叶中 4 种化合物的含量差别较大，内蒙 古产地的膜荚黄芪叶中去氢二松柏醇-4-O-β-D葡萄糖和鼠李柠檬素-3-O-β-葡萄糖苷含量较黑 龙江不同产地的含量低，但是黑龙江不同产地的膜 荚黄芪叶均含有去氢二松柏醇-4-O-β-D-葡萄糖、 鼠李柠檬素-3-O-β-新橙皮糖苷、山奈酚 3-O-[6′′ -O-（反式-对-肉桂酰基）]-β-D-葡糖糖苷和鼠李 柠檬素 3-O-β-D-葡萄糖苷，其中绥芬河中4种成分含量较其他产地高，其他产地 4 种成分含量相差 较小。这可能与地域相近有关。

4 结论

建立了具有稳定、准确、便捷等特点的 HPLC-PDA 方法，同时测定了膜荚黄芪叶中 4 种化合物，其中 1 种为木脂素类化合物，3 种为黄酮类化 合物，首次同时测定不同产地膜荚黄芪叶中去氢二 松柏醇-4-O-β-D-葡萄糖、鼠李柠檬素 3-O-β-D葡萄糖苷、山奈酚 3-O-[6′′-O-（反式-对-肉桂酰 基）]-β-D-葡糖糖苷和鼠李柠檬素-3-O-β-新橙皮 糖苷 4 种化学成分的含量，为膜荚黄芪叶的黄酮类 和木脂素类化合物的质量控制提供了理论基础。



 

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