染色剂金橙II检测方法的改进-KQ-5200DE使用

跌打丸是由三七、当归、白芍、赤芍、桃仁、红花、血竭等 24 味中药饮片经粉碎、蜜制而成的大处方蜜丸制剂，收 载于《中华人民共和国药典》2015 年版一部。

1 材料与方法

1.1 样品来源

在甘肃省 2018 年评价性抽验工作中，共收到省内 16 个县跌打丸样品（市、区）24 批次，均为大蜜丸，被抽样单 位涉及经营单位 14 个，医疗机构 10 个，样品来自国内 4 家生产企业。

1.2 仪器与试药

岛津 UFLC -20ADXR 高效液相色谱仪 （日本岛津公 司，PDA 检测器）；MS205DU 电子天平（上海梅特勒托利多仪器有限公司）；KQ-5200DE超声清洗器（昆山舒美超声仪器有限公司）；Dura 12V 型超纯水机（美国 The Lab 泽拉布 公司）。金橙Ⅱ对照品购于中国食品药品检定研究院，批 号：111769-201302；乙腈为色谱纯试剂；水为本实验室制 备的超纯水；其余试剂均为分析纯。

1.3 检验依据

在国家食品药品监督管理总局药品检验补充检验方 法和检验项目批准件（2014005）的基础上，对洗脱条件进 行调整，最终实现跌打丸中金橙Ⅱ的检测。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱 Phenomenex Gemini C18 色谱柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm），流动相：0.02 mol/L 醋酸铵溶液（A）-乙腈（B），洗 脱梯度见表 1。流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL，检测波长： 484 nm；柱温：35 ℃。理论板数按金橙Ⅱ峰计算不低于 2 000。

2.2 对照品溶液的制备

精密取金橙Ⅱ对照品适量，加乙醇制成每 1 mL 约含 金橙Ⅱ10 μg 的储备液；精密量取储备液 5 mL 于 100 mL量瓶中，加乙醇至刻度，混匀，即得对照品溶液（每 1 mL 含金橙Ⅱ0.465 0 μg）。

2.3 供试品溶液的制备

2.3.1 阴性供试品溶液的制备

取本品 3 丸，剪碎，加 4.5 g 硅藻土，研匀，取约 4.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加 10 mL 乙醇，超声处理（功率 250 W，频率 40 kHz） 20 min，冷即至室温，取上清液过滤，滤液即得。

2.3.2 阳性供试品溶液的制备

因跌打丸中均未检出金 橙Ⅱ，所以采用标准加入法制备阳性样品，分别精密量取 阴性供试品溶液 1.0 mL 和对照品储备溶液 0.3 mL，混匀 即得。

3 讨论

3.1 供试品制备方法的选择

本次抽检的跌打丸剂型均为大蜜丸，在前处理中比较 了加硅藻土和不加硅藻土的区别，结果发现不加硅藻土直 接乙醇超声处理 30 min 内样品呈现块状，不易分散；而加 入硅藻土能提前分散样品，大大减少样品溶液的沉淀时 间，上清液也比较容易过滤。考察了提取溶剂，尝试 70% 乙醇、乙醇、甲醇作为溶剂分别提取，结果表明用乙醇提取 最为完全。

3.2 流动相的选择

跌打丸组方药味多，各化学成分极性差别较大，按照 原标准洗脱条件进行洗脱难以分离。分别考察了乙腈-水，乙腈-0.02 mol/L 醋酸铵溶液不同比 例，对梯度时间进行了研究调整，最终确定了本试验条件。

3.3 结论

中成药是以中药饮片为原材料加工的，所以中药饮片 是否染色也就关乎中成药的质量。本试验为生产企业测定 非法染色剂金橙Ⅱ的含量提供了参考依据。