儿茶素类物质的提取及含量测定-KQ-250E使用

茶叶是人们日常喜欢的饮品之一，茶叶中含有多种 天然活性物质。茶多酚是茶叶中的主要有效成分，占干 质量的 15% ～ 30%，儿茶素类占其中的 60% ～ 80%。 主要包括表儿茶素( epicatechin，EC) 、表没食子儿茶素 ( epigallocatechin，EGC) 、表儿茶素没食子酸酯( epicatechin gallate，ECG) 、表没食子儿茶素没食子酸酯( epigallocatechin gallate，EGCG) 。

1 材料与方法

1. 1 仪器与试剂

1. 1. 1 仪器

高效液相色谱仪( Alliance 2695 /2498，美国 Waters 公司) ; 色谱柱( AcclaimTM 120，美国 Thermo scientific 公司) ; BT25S 电子分析天平( 北京赛多利斯仪器 有限公司) ; KQ-250E 型超声波清洗仪( 昆山舒美超声仪器有限公司) ; ＲCTBS025 控温磁力搅拌器( 德国 IKA 公司) ; 高速离心机( 日本久保田 2420) ; UV2550 紫外 可见分光光度计( 日本岛津公司) 。

1. 1. 2 试剂

标准对照品 CAF 购自美国 Alfa Chemical 公司 ; EGCG、ECG、EC 购自大连美仑生物技术有限公司。 甲醇( 色谱纯，购自美国 Fisher 公司) ，水为双蒸水。 无水乙醇( 分析纯) 购自北京现代东方精细化学品 有限公司; 36% 乙酸( 分析纯) 购自国药集团化学试 剂有限公司。实验所用茶叶均为北京市商品市售 茶叶。

1. 2 溶液的配制

1. 2. 1 对照品储备溶液

分别精密称取 CAF 50 mg、EGCG 75 mg、ECG 50 mg、EC 15 mg 标准对照品，置于 50 mL 容量瓶，加适 量无水乙醇溶解后，稀释至刻度，摇匀后配制成 CAF 质量浓度为 1 mg /mL、EGCG 质量浓度为 1. 5 mg /mL、 ECG 质量浓度为 1 mg /mL、EC 质量浓度为 300 μg / mL 的储备液。

1. 2. 2 茶叶样品溶液

茶叶样品用研钵捣碎，准确称取茶叶样品加入到 锥形瓶中，采用不同浓度的提取溶剂乙醇，控制不同 的提取时间，不同料液比，分别进行加热和超声波辅 助浸提法工艺进行提取。把提取所得的茶叶溶液用 离心机以 4 000 r /min 离心 10 min，取上清液经 0. 45 μm 的微孔滤膜过滤，取滤液 200 μL，加入流动相 800 μL，作为样品溶液进行 HPLC 测定。

1. 3 检测波长的选择

取标准对照品溶液，在 200 !400 nm 波长范围内 进行扫描，详见图 1。实验选择 280 nm 为检测波长， 此波长下 CAF、EGCG、ECG、EC 均有较强的紫外吸 收，并且基线平稳，信噪比高。

1. 4 色谱条件

色谱柱为 C18( 5 μm × 4. 6 mm × 250 mm) ; 流动 相为甲醇∶ 双蒸水∶ 36% 乙酸( 25 mL∶ 74 mL∶ 1 mL) ; 流速为 1 mL /min; 检测波长为 280 nm，柱温为室温; 进样体积为 10 μL。

2 结果

加热浸提法是传统的提取工艺，提取条件简单易 行，为防止一些物质结构发生变化，提取温度不宜太高。由于 CAF、EGCG、ECG 和 EC 都能溶于乙醇中，实验以 乙醇溶液为提取溶剂，采用市售绿茶为样本，把所得提取 液按照“1. 2. 2”以及“1. 4”项下色谱条件进行处理和测 定，通过单因素实验来考查乙醇的浓度、浸提时间、料液 比不同对 CAF、EGCG、ECG、EC 提取率的影响。超声波提取是利用超声波机械粉碎和空化作用， 加速提取物从茶叶向溶剂扩散的速度，增加有效成分 的提取率，可避免加热造成如儿茶素类物质的氧化。 实验以乙醇为提取溶剂，采用市售绿茶为样本，在室温 条件下，以超声功率为 250 W 进行提取。把所得提取 液按照“1. 2. 2”以及“1. 4”项下色谱条件进行处理和测 定，通过单因素实验考查乙醇的体积分数、超声时间、 料液比不同对 CAF、EGCG、ECG、EC 提取率的影响。

3 讨论

茶叶中含有多种有效成分，本实验是研究不同提 取工艺，同时复合提取 CAF、EGCG、ECG、EC 这 4 种 有效成分。从加热和超声提取工艺来看，较高的浸出 率是乙醇提取浓度在 50% !75% 范围内。推断是因为 几种物质在乙醇和水中都有一定的溶解度，但由于它 们结构中含有亲水和疏水基团，所以纯粹用水或用乙 醇做提取溶剂都不能达到它们最大的浸出度，而一定比例的醇、水混合是最合适的提取剂，所以实验选定 了 65% 的乙醇为提取浓度。