浅谈带疱止痛合剂中3种活性成分的含量

带疱止痛合剂是南京中医药大学连云港附属 医院的协定处方制剂，该药物由柴胡、郁金、白芍、 制香附、元胡、桃仁、红花、麦冬、丹皮、丹参、生地、 酸枣仁、生甘草等药味制成，其中柴胡为君药，郁 金、白芍为臣药，现有的质量控制方法主要是薄层 鉴定法，对君臣药进行定性鉴别，尚无对其主要成 分进行含量测定的方法，而对主要活性成分进行含 量测定，已是中药质量控制的必然趋势，故对带疱 止痛合剂的主要活性成分进行含量测定，是一个亟 待解决的课题。

Agilent 1200 型高效液相色谱仪，含 Model 1200 型检测器; FA － G 系列感应窗型分析天 平: 常州万台天平仪器有限公司; KQ － 100VDB 型双 频 超 声 波 清 洗 器: 昆山舒美超声仪器有限公司; KH19A 型台 式 离 心 机: 湖南凯达科学仪器有限 公司。

带疱止痛合剂: 由柴胡、郁金、白 芍、制香附、元胡、桃仁、红花、麦冬、丹皮、丹参、生 地、酸枣仁、生甘草等药味制成，由南京中医药大学 连云港附属医院制备。柴胡皂苷 A 对照品( 批号: 101205 － 201603) 、莪术二酮对照品( 批号: 111023 － 201608 ) 、芍 药 苷 对 照 品 ( 批 号: 120621 － 201607) : 均购于中国食品药品检定研究院。乙腈 为色谱纯: Fisher 公司; 氨水、正 丁 醇、甲 醇( 分 析 纯) : 浙江三鹰化学试剂有限公司; 水为超纯水。

Agilent Zorbax Eclipse XDB － C18色 谱柱( 4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ; 混合流动相: 乙腈 为流动相 A，0. 5% 醋酸溶液( 以三 乙 胺 调 pH 至 6. 0) 为流动相 B，梯度洗脱，洗脱顺序见表 1; 流速: 1. 0 mL·min － 1 ; 柱温: 25℃ ; 进样量: 10 μL; 检测波 长: 215 nm。 

2. 2 混和对照品溶液制备

精密称取柴胡皂苷 A 对照品 225. 00 mg、莪术二酮对照品 50. 00 mg、芍药 苷对照品 125. 00 mg，分别置于25 mL量瓶中，加甲 醇溶解并定容，摇匀，即得柴胡皂苷 A 对照品储备 溶液、莪术二酮对照品储备溶液、芍药苷对照品储 备溶 液; 分 别 精 密 量 取 3 种对照品储备溶液各 2 mL，置于同一25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度， 制成含柴胡皂苷 A、莪术二酮、芍药苷浓度分别为 0. 720、0. 160、0. 400 g·L － 1的混和对照品溶液。

精密量取带疱止痛合剂 25 mL，加入 0. 5% 磷酸水溶液( 含 0. 1% 三乙胺) 25 mL，回流提取 25 min 后，离心 5 min，取上清液， 下层沉淀再用 0. 5% 磷酸水溶液( 含 0. 1% 三乙胺) 25 mL，回流提取 25 min 后，离心 5 min，取上清液， 将两次所得的上清液合并，用水饱和的正丁醇萃取 2 次，每次 50 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇 溶解，定容至 5 mL 量瓶中，摇匀，离心 5 min，取上清 液，即得供试品溶液。

按照带疱止痛合剂的 原方分别去除柴胡、郁金、白芍，按带疱止痛合剂的 制备工艺进行制备，即得不含柴胡的阴性供试品溶 液、不含郁金的阴性供试品溶液、不含白芍的阴性 供试品溶液。

以乙醇、水、 0. 5% 磷酸水溶液( 含 0. 1% 三乙胺为提取溶剂，对 超声提取、热回流提取、冷浸提取进行了考察，并对 提取次数、提取时间、萃取溶剂也进行了研究，实验 结果表明，以 0. 5% 磷酸水溶液( 含 0. 1% 三乙胺) 为提取溶剂，热回流提取 2 次，提取 30 min，水饱和 正丁醇萃取 2 次，此制备方法所得的供试液中柴胡 皂苷 A、莪术二酮、芍药苷含有量最高。考察了 3 种流动相，分别为: 甲醇 － 乙腈、乙腈 － 0. 5% 醋酸溶液( 以三乙胺调 pH 至 6. 0) 、甲醇 － 0. 5% 醋酸溶液( 以三乙胺调 pH 至 6. 0) ，实验结果显示，以乙腈 － 0. 5% 醋酸溶液( 以三 乙胺调 pH 至 6. 0) 为流动相，梯度洗脱，柴胡皂苷 A、 莪术二酮、芍药苷分离效果好，干扰少，峰形较佳。考察了 4 个检测波长，分别为: 205、215、245、258 nm，实验 结果显示，当检测波长为 215 nm 时，柴胡皂苷 A、莪 术二酮、芍药苷 3 种成分均有较大吸收峰，峰型好， 干扰少，分离较高。



 

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