分析丹参水提取物成分的定性

丹参为唇形科植物丹参 Salvia miltiorrhize Bge. 的干燥根和根茎，始载于《神农本草经》，具 有活血祛瘀、通经止痛和清心除烦的功效。丹参 的有效成分有水溶性和脂溶性 2 大类，本实验中的 丹参水提取物为水溶性成分，以丹酚酸 B （salvianolic acid B）和紫草酸（lithospermic acid） 等酚酸类物质为主要成分。目前，丹参水提取物中 的含量较高的主要成分研究已经很多，本实验基 于四极杆-飞行时间质谱技术（Q-TOF-MS）进一步 分析了丹参水提取物中的化学成分；并对部分用 常规手段难以检测的低含量成分，基于四极杆-线性 离子阱质谱（Q-Trap-MS）技术与方法进行了 半定量研究。半定量的方法目前研究尚少，但 对没有对照品的物质来说却极为重要。

AcquityTM UPLC 超高效液相色谱系统、Synapt G2 Q-TOF-MS 质谱系统、MassLynx V4.1 质谱工作 站、Acquity UPLC HSS T3 色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），美国 Waters 公司；AB SCIEX Q-Trap 5500液质联用系统，岛津UFLC超高效液相系统（配 备 DGU-20A5R 脱气机，SIL-30AC 自动进样器， CTO-30A 柱温箱，LC-30AD 液相泵）；KQ-500DE 型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；XS105 型十万分之一天平，梅特勒-托利多仪器有限 公司。水为超纯水，Milli-Q 型超纯水系统，德国 Millipore 公司；甲醇、乙腈，质谱纯，德国 Merck 公司；甲酸，质谱纯，美国 Sigma 公司；其余试剂 均为分析纯。 对照品丹酚酸 B（批号 111562-201716，质量分 数 94.1%），购自中国食品药品检定研究院；紫草酸 （批号 FY18351203，质量分数 96.3%），购自南京飞 宇生物科技有限公司。5 批丹参水提取物批号分别 为 20100201、20110503、20111205、20111206、 2014A02，均由天津天士力之骄药业有限公司提供， 该提取物由水煮沸提取而得。

称取丹酚酸 B 对照品 0.91 mg 和紫草酸对照品 0.99 mg，分置 100 mL 量瓶中，加纯水溶解，定容 至刻度。再分别稀释 2、10、50、100、200、500 和 1 000 倍，备用。

称取 5 批丹参水提取物各约 1 mg，分置 2 mL 量瓶中，加纯水溶解，定容至刻度，备用。

色谱柱为 Waters Acquity UPLC HSS T3 柱（100 mm×2.1 mm， 1.8 μm），柱温 30 ℃，样品室温度 4 ℃。流动相为 乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱，0～3 min，10%～ 19%乙腈；3～10 min，19%～23%乙腈；10～12 min， 23%～30%乙腈；12～14 min，30%～50%乙腈；14～ 20 min，50%～90%乙腈；20～21 min，90%～10% 乙腈；21～22 min，10%乙腈；进样量 5 μL，体积 流量 0.3 mL/min。

色谱柱为 Waters Acquity UPLC HSS T3 柱（100 mm×2.1 mm， 1.8 μm），柱温 40 ℃。流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶 液，梯度洗脱：0.5～12 min，10%～35%乙腈；12～ 15 min，35%～70%乙腈；15～17 min，70%～100% 乙腈；17～18.4 min，100%乙腈；18.4～19 min， 100%～10%乙腈；进样量 3 μL，体积流量 0.3 mL/min。另外，在检测未知成分时，将色谱柱流出 液在 0～6 min 进废液，6～8.4 min 进质谱，8.4～10.6 min 进废液，10.6～15 min 进质谱，15～19 min 进 废液。检测紫草酸和丹酚酸 B 对照品时，0～19 min 进质谱。

采用电喷 雾离子源（ESI），负离子模式，毛细管电压 2.5 kV， 锥孔电压 40 V，提取锥孔电压 5 V，离子源温度 110 ℃，脱溶剂气体（N2）温度为 350 ℃，脱溶剂气体 流量 800 L/h，锥孔气流量 50 L/h，采集频率 0.2 s。 用亮氨酸脑啡肽作为内标（Lock SprayTM）进行质 量实时校正，体积流量为 5 μL/min。同样质谱条件 下的 3 种质谱检测模式分别为（1）MSE Continuum 扫描模式检测，扫描时碰撞能量为 20～30 eV，质 量扫描范围 m/z 100～1 500。（2）MS/MS 模式下检 测，碰撞室 Trap CE Control 使用线性能量扫描 20～ 30 eV，且碰撞室 Transfer CE Control 关闭。

离子源为 电喷雾离子源（负离子模式）；离子喷射电压：−4 500 V；温度：450 ℃；源内气体 1（GS1，N2）压力：310 kPa；源内气体 2（GS2，N2）压力：310 kPa； 气帘气体（N2）压力：138 kPa；应用 MRM 模式进 行半定量分析，待测物质谱参数见表 1，表中参数 的选择依据按照“2.6.1”项和“2.6.2”项下说明。 

丹参水提取物中多为水溶性成分，且绝大部分 为酚酸类物质，在选用色谱柱的时候，因考虑到样 品的特殊性，并参考其他的文献，最后选用 Acquity UPLC HSS T3 柱，展现了良好的分离效果。另外，因大部分成分含有羧基，易脱 1 个氢离子，形成 [M－ H]− ，所以在用 Q-TOF-MS 进行分析的时候，选用 负离子模式。

在对丹参水提取物中的成分进行定性研究时， 并未使用对照品，而是通过查阅文献和数据库的方 式进行定性。先建立已报导的丹参的质谱谱库（包 含母离子、子离子和保留时间），再比对质谱图中各成分的碎片离子和保留时间，从而确定物质的结构。 一定程度上节省了资源，也加快了定性分析的时间， 更加方便后期对丹参更深入的研究。

丹参水提取物中包括同分异构体共 11 种未知 成分的含量较低而丹酚酸B 和紫草酸等成分含量特 别高，使检测器达到饱和，遂使保留时间在 8.4～ 10.6 min 的成分（丹酚酸 B、紫草酸等）经色谱后直接进入废液，而不进入质谱检测器。这样，提高 11 种待测物质量浓度的同时，也不会有过多的酚酸 类的物质进入质谱，产生残留或影响检测器灵敏度。



 

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