护肝片中牡荆苷和异牡荆苷的含量分析

护肝片具有抑制肝纤维化、保肝、降酶等作用，是目前国内治疗肝损伤、早期肝癌及化疗药物性肝损伤的常用中成药。目前护肝片的质 量标准中仅以五味子醇甲作为指标对成方质量进行评价，可能无法准确评价护肝片质量或消除为达到质 量要求而仅添加单一成分的情况。

METTLER AE240（十万分之一）、SARTFORUIS AG BS（万分之一）电子分析天平（施耐德），HW.SY21-K 型电热恒温水浴锅（北京市长风仪器仪表公司），KQ400KDE 型高功率数控超声波清洗器（昆山舒美）。 　　Waters 1525 高效液相色谱仪（美国 Waters 公司，包 括 Breeze2 HPLC 色谱工作站，Waters 2414 示差折光检 测器，Waters 2707 自动进样器，Waters 038040 柱温箱）。

乙腈（HPLC 级，Fisher 公司），水为纯净水（杭州 娃哈哈集团有限公司），其他试剂均为分析纯（北京化 工厂）；牡荆苷（批号：Y25A8H42502）、异牡荆苷（批 号：Y07J8H39516）对照品（上海源叶生物科技有限公 司，纯度均大于 98%）。护肝片（糖衣片，片心重 0.35 g）为市售样品，共收集了 16 个不同厂家 30 批样品， S1-1 ～ S1-15 来自同一厂家，S2 ～ S16 分别来自其他 不同厂家。

色谱柱：Prevail C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）； 流动相：乙腈 - 水（20∶80）；柱温：30℃；检测波长： 337 nm，流速：1 mL·min － 1 ；进样体积：15 μL。理 论塔板数按牡荆苷和异牡荆苷计不低于 3000。对照品和样品色谱图见图 1。

分别精密称取牡荆苷和异牡荆苷对照品适量，置 10 mL 量瓶中，用70% 甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀， 即得单个对照品储备液（牡荆苷和异牡荆苷质量浓度 分别为 0.496 mg·mL－ 1 和 0.552 mg·mL－ 1 ）。 再 分 别精密吸取牡荆苷和异牡荆苷对照品储备液各 2 mL 置 10 mL 量瓶中，加 70% 甲醇溶解并稀释至刻度，摇 匀，即得混合对照品储备溶液（牡荆苷 99.2 μg·mL－ 1 ，异牡荆苷 110.4 μg·mL－ 1 ）。

2.3　供试品溶液的制备 　　

先取同一批护肝片 10 片，除去包衣，研成细粉； 再取护肝片粉末约 1.4 g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入 70% 甲醇 25 mL，密塞，称重，置水浴 加热回流 90 min，放冷，再称定重量，用 70% 甲醇补 足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

根据文献报道，牡荆苷和异牡荆苷是绿豆中两种 含量较高的黄酮类成分，具有较好的抗氧化、抗肝毒、 抗菌、抗炎及心血管保护作用，是绿豆中的主要活性 成分。因此，本研究选择牡荆苷和异牡荆苷作为测定 指标对护肝片进行含量测定。将牡荆苷和异牡荆苷对照品溶液分别进行全波长 扫描，两者均在 337 nm 下有最大吸收，故选 337 nm 为牡荆苷和异牡荆苷含量的测定波长。因黄酮类成分 在甲醇中溶解度较好，故选择甲醇作为提取溶剂，对 比不同浓度的甲醇提取结果，最终选择 70% 甲醇作为 最佳提取溶剂。此外，通过优化回流时间并与超声提 取结果进行比较，最终确定 70% 甲醇回流 90 min 为提 取方法。在所确定的色谱条件下，对照品及样品的色谱图 中在保留时间约 3.8 min 处均出现一色谱峰，空白溶剂 也在此处出峰，故确定此峰为溶剂峰。



 

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