常山为虎耳草科植物常山 (Dichroa febrifuga Lour.)的 干燥根,常山甲素和常山乙素是其中主要的有效成分之 一,具有良好的抗疟疾、抗肿瘤和抗球虫等作用。黄柏 为芸香科植物黄柏的干燥树皮,别名功劳木、三颗针。黄 柏去外皮、切片,经硫磺熏过后,其性状颇似常山,但其功效、成分和常山完全不同。本课题组研究发现,黄柏中也含 有少量常山碱。笔者等采用用高效液相色谱法测定 3 批常 山和黄柏中常山甲素和常山乙素的含量,为今后常山药材 鉴别和质量评价提供参考。
常山、黄柏均购于兰州中药材批发市场;常山甲素和 常山乙素对照品,纯度为 98%以上,购于中国兽医药品监 察所;KQ-300DE超声波清洗机,购于昆山舒美超声仪器有限公司;超声频率 40 kHz,超声功率 400 W;安 捷伦 1290 型高效液相色谱仪,购于美国安捷伦公司;乙腈 为色谱纯;水为屈臣氏纯净水。
采用酸水处理和超声提取组合方法提取黄柏和常山 中提取常山碱。 1.3 含量测定 1.3.1 色谱条件、对照品和供试品溶液制备 参照文献制备。
取 1 mg/mL 对照品溶液,用流动 相稀释为 0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、 25 μg/mL,注入液相色谱仪进行测定。以浓度为横坐标、峰 面积为纵坐标绘制标准曲线,计算回归方程。
取 3 批常山和黄柏的提取物,按照 “1.3.1”进行供试品溶液的制备,分别吸取 10 μL,注入液 相色谱仪,测定常山甲素和常山乙素的含量。
3 批常山中常山甲素含量为 0.320%、0.316%和 0.342%, 平均含量为 0.326%。3 批黄柏中常山甲素含量为 0.004%、 0.003%和 0.004%,平均含量为 0.004%。3 批 常 山 中 常 山 乙 素 含 量 为 0.245% 、0.230% 和 0.255%,平均含量为 0.243%。3 批黄柏中常山乙素含量为 0.002%、0.001%和 0.002%,平均含量为 0.002%。
常山具有良好的抗疟疾、抗肿瘤和抗球虫等药理作 用。常山中主要有效成分为常山碱,包括常山甲素和常山 乙素,两者互为同分异构体,在一定条件下易相互转化。但是常山在发挥药效的同时,具有较强的毒副作用,常山 碱正是导致常山毒副作用的主要成分。通过市场调查发 现,不同来源的常山药材或饮片中常山碱的含量差异很大 (0.012%~0.511%),这可能与常山药材的产地、生长年限、 采收季节、加工炮制方式等有关系。常山与硫磺熏过后的黄柏外观极其相似,但前者呈 圆柱状,常弯曲扭转,直径也较小(0.5~2.0 cm),后者实为 黄柏树干,直径较粗,人为切割后多呈片状或块状。常山和 黄柏水煎液荧光反应也不同,两者在紫外灯下分别呈天蓝 色和黄色。本试验发现,3 批常山和黄柏中常山甲素的平 均含量分别为 0.326%和 0.004%,常山乙素的平均含量分 别为 0.243%和 0.002%,结果说明黄柏中常山碱的含量极 低,根本不具备常山的药理活性。本试验为今后常山鉴别 和质量评价提供了试验依据。
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