KQ3200E型对于柴胡桂枝汤的研究分析

柴胡桂枝汤出自《伤寒论》，为张仲景创立的经典 方剂，由小柴胡汤和桂枝汤加减而来，全方由柴胡、半 夏、人参、甘草、黄芩、生姜、大枣、桂枝、芍药 9 味药组成， 既能调理营卫气血，又能和解表里，疏肝利胆，达到扶正 祛邪之目的 ，用于太阳少阳合病引起的发热恶寒、肢 体疼痛等症。

岛津公司 LC-IT-TOF-MS 液相色谱串联离子阱 飞行时间质谱仪，配置自动进样器、柱温箱、UV 检测 器；LC-MS solution 工 作 站；岛 津 公 司 Inertsil ODSSP C18 色 谱 柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；Eppendorf 5424 R 小型冷冻高速离心机离心机；0.22 μm 微孔滤 膜，津腾公司；天津市泰斯特仪器有限公司 98- Ⅰ-B 电子调温电热套；赛多利斯科学仪器（北京）有限公 司 BSA224S-CW 电子天平；昆山市超声仪器有限公 司 KQ3200E 型超声波清洗器。

采用 Inertsil ODS-SP C18 色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），以 0.1% 甲酸水溶液（A）-0.1% 甲酸甲醇 溶液（B）为流动相，梯度洗脱（0~3 min，30%B；3~18 min，30%B → 40%B；18~30 min，40%B → 50%B；30~57 min，50%B → 75%B；57~65 min，75%B → 85%B；65~70 min，85%B → 95%B；70~75 min，95%B；75~85 min， 95%B → 30%B），流速 0.6 mL·min-1，检测波长 275 nm，柱温 25 ℃，进样量 5 μL。采用电喷雾化离子源，离子源温度为 120 ℃，毛 细管电压 3 200 V，质量扫描范围 m/z 100~1 000，干燥 气体积流量 10 L·min-1 ，干燥气温度 300 ℃。取 柴 胡 桂 枝 汤 药 液，加 超 纯 水 稀 释 至 0.14 g·mL-1 ，涡旋 1 min，12 000 r·min-1 高速离心 10 min， 取其上清液过 0.22 μm 的微孔滤膜，即得供试品溶液。取各对照品适量，精密称定，加甲醇配制成混合 对照品溶液（甘草苷 80 μg·mL-1 ，黄芩苷 85 μg·mL-1 ， 汉黄芩素 90 μg·mL-1 ，人参皂苷 Re 180 μg·mL-1 ，姜黄 素 75 μg·mL-1 ，芍药苷 165 μg·mL-1 ），过 0.22 μm 微孔 滤膜，冷藏备用。

本实验考察对比了不同的流动相系统，包括乙 腈 - 水、0.1% 甲酸乙腈 -0.1% 甲酸 水溶液、甲醇 - 水、0.1% 甲酸甲醇 -0.1% 甲酸水溶液；结果表明， 以 0.1% 甲酸甲醇 -0.1% 甲酸水溶液体系为流动 相，采用梯度洗脱，能够达到较好的洗脱效果，各色 谱峰的峰形和分离度相对较好，故选用 0.1% 甲酸甲醇 -0.1% 甲酸水溶液作为流动相系统。柱温考 察 15、20、25、30、40 ℃，柱温度降低分离度增加，但 保留时间也相应延长，综合考虑选择 25 ℃作为分离 柱温。流动相流速考察 0.4、0.6、0.8 mL·min-1。0.8 mL·min-1 色谱峰分离度降低，个别色谱峰发生合 并；0.4 mL·min-1 各色谱峰保留时间增加，故选择 0.6 mL·min-1，分离度好，保留时间适中。