前胡类药材HPLC特征图谱研讨

前 胡，首 载 于《名 医 别 录》，列 为 中 品 ，来 源于伞形科前胡属植物白花前胡 Peucedanum praeruptorum Dunn 的干燥根，具有降气化痰及散风清 热的功效，用于痰热喘满，咳痰黄稠，风热咳嗽痰多等 症的治疗 ，主产于甘肃、河南、贵州等地 。现代 研究发现，前胡的化学成分主要包括香豆素、菲醌、有 机酸、甾醇及挥发油等类化合物 ，具有止咳、平喘 等药理活性。

Waters 2695 高效液相色谱仪（包括四元泵、PDA 检 测 器、自 动 进 样 器 及 Empower 工作站；Waters 公 司），Mettler MS105DU 电 子 天 平（Mettle-Toledo 公 司），KQ-300DA型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。Umetrics Ezinfo 数据处理软件 （Waters 公司）。 甲醇为色谱级，水为 Milli-Q 超纯水，其他试剂 均为分析纯。对照品白花前胡甲素（批号 111711- 200602，含 量 以 100% 计）、白 花 前 胡 乙 素（批 号 111904-201203，含量以 98.0% 计）、紫花前胡苷（批 号 111821-201604，含 量 以 99.6% 计）均 来 自 中 国 食品药品检定研究院；白花前胡 E 素（批号 DFZY20180112，含量以 99.9% 计）购自成都瑞芬思生物技 术有限公司。采集时间为 2017 年 8 月—12 月，并经中国食品药品检定研究院程显 隆研究员鉴定。

采用Aglient TC-C18（2）色 谱 柱（4.5 mm×250 mm，5 μm），以水（A）- 甲醇（B）为流动相，梯度洗脱 （0~15 min，40%B；15~16 min，40%B → 48%B；16~26 min，48%B → 75%B；26~55 min，75%B → 95%B； 55~56 min，95%B → 99%B；56~60 min，99%B），流速 1.0 mL·min-1，检测波长 325 nm，柱温 30 ℃，进样量 5 μL；理论塔板数以白花前胡甲素峰计算应不得小于 4 000。

取紫花前胡苷、白花前胡甲素、白花前胡乙素、 白花前胡 E 素的对照品适量，精密称定，加甲醇溶解 制成上述 4 个成分分别含 0.509 9、0.465 5、0.501 2、0.504 9 mg·mL-1 的混合对照品储备液。精密量取混 合对照品储备液 1.0 mL，置于 10 mL 量瓶中，加甲醇 稀释至刻度线，摇匀，即得。

取样品粉碎，过 4 号筛，取粉末约 0.25 g，精密称 定，置 100 mL 锥形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，称定 质量，超声处理（功率 240 W，频率 45 kHz）20 min， 放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的量，摇匀，过 0.22 μm 微孔滤膜，取续滤液，即得。

分 别 取 QH-01、ZHQH-01 及 YQH-01 号药材粉末约 0.25 g，精 密 称 定，分 别 按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别连续进样 6 次，记录色谱图，考察仪 器的精密度。结果表明，各主要色谱峰保留时间的 RSD 均小于 0.5%；各主要色谱峰峰面积的 RSD 均 小于 3.0%，采用 Chempattern 化学计量学软件进行 数据处理，相似度均大于 0.95，表明仪器的精密度 良好。

分 别 取 QH-01、ZHQH-01 及 YQH-01 号药材粉末 6 份，精密称定，按“2.3”项下 方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别 进样分析，记录色谱图，考察方法的重复性。结果表 明，6 份样品中各主要色谱峰保留时间的 RSD 均小 于 0.5%，各色谱峰峰面积的 RSD 均小于 1.5%，采用 Chempattern 化学计量学软件进行数据处理，相似度 均大于 0.95，表明重复性良好。

取精密度试验项下供试品溶液， 按“2.1”项下色谱条件，分别在 0、4、8、12、18 h 进行 测定，考察供试品溶液的稳定性。结果表明，各主要 色谱峰保留时间的 RSD 均小于 0.6%，各色谱峰峰面 积的 RSD 均小于 3.0%，采用 Chempattern 化学计量 学软件进行数据处理，相似度均大于 0.95，表明供试 品溶液的稳定性良好。

本实验考察了不同提取溶剂（甲醇、三氯甲烷、 50% 乙醇）、不同的提取方法（超声、回流）及不同的 提取时间（10、20、30 min）等因素对提取效率的影 响，最终比较测定结果并结合环保的考虑，确定以甲 醇为提取溶剂，超声提取 20 min，提取效率最高，方法 操作简单，结果可靠。采用二极管阵列检测器进行扫描，考察不同吸收 波长处的图谱响应强度，紫花前胡苷、白花前胡甲素、 白花前胡乙素及白花前胡 E 素分别在 335.7、322.5、 320.1 及 322.5 nm 处有最大吸收，本研究侧 重于前胡药材中的主要香豆素类化合物，对 321、325 和 335 nm 处的谱图信息比较发现，在 325 nm 处各成分 具有良好的紫外吸收，基线平稳，且色谱图信息更丰富。本实验采用特征图谱结合主成分分析法，可有效 地区分前胡、紫花前胡、硬前胡，并可以找出对整体差 异性贡献比较大的化学成分，为选择指标成分进行质 量控制提供了科学依据。