肿节风高效薄层色谱分析

肿节风为金粟 兰科植物草珊瑚 Sarcandra glabra ( Thunb．) Nakai 的 干 燥 全 草，具有显著的抗菌、消 炎、抗肿瘤作用，临床疗效确切，已知活性成分有异 嗪皮啶等香豆素类和迷迭香酸等有机酸类，此外还 有黄酮、倍半萜和挥发油等。2015 年版 《中国药典》 及相关报道中有关肿节风的薄层鉴别大多仅检测了 指标成分异嗪皮啶，一般均采用传统 TLC 法，在实际操 作过程中发现部分斑点间重叠，不能得到很好的分离，未 能充分反映该药材信息，从而影响了方法灵敏度，而且 《中国药典》采用甲苯展开系统，毒性较大。因此，本研 究在 2015 年版 《中国药典》基础上，通过展开条件的优 化寻找极性合适、毒性较小的溶剂替代甲苯，探索专属性 强、灵敏度高的肿节风高效薄层色谱 ( HPTLC)  鉴别 方法。

BP211D 电 子 天 平 ( 十 万 分 之 一，德国赛多利斯公司) ; KQ3200E 超 声 波 清 洗 器 ( 昆山市超声仪器有限公 司) ; 定量毛细管 ( 美国 Dummond 公司) ; 硅胶 G60 高效 薄层板 ( 德国 Merck 公司) ; 硅胶 G60 薄层板 ( 德国 MN 公司) ; 硅胶 G60 薄层板 ( 山东烟台维启化工产品有限公 司) 。异嗪皮啶 ［萨恩化学技术 ( 上海) 有限公司，批号 BI180108，含有量 97. 86%］; 迷迭香酸 ( 美国 Sigma 公司， 批号 MKBQ 2631V，含 有 量 98. 74%) ; 肿节风对照药材 ( 广州市药品检验所，批号 121048-201205) 。所用试剂均为 分析纯。 13 批药材 ( S1 产自河北，S2 ～ S3 产自浙江，S4 产自 重庆，S5 产自四川，S6～ S9 产自江西，S10 产自福建，S11 产自广东，S12～ S13 产自广西) 均由广州市药检所中药室顾利红主任药师鉴定为正品。

取药材粉末 2 g，加 50 mL 水超声 处理 30 min，滤过，滤液加乙酸乙酯振摇提取 2 次，每次 25 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加 1 mL 甲醇溶解， 即得。

取异嗪皮啶、迷迭香酸 对照品适量，加甲醇制成每 1 mL 分别含 0. 5 mg 2 种成分的 相应溶液。另取对照药材粉末 2 g，按 “2. 1”项下方法制 备相应溶液。

以异嗪皮啶、迷迭香酸对照品溶液和 对照药材作为参照，将药材供试品溶液 ( S7) 点于同一块 硅胶 G60 高效薄层板上，选择了 3 种展开溶剂，置紫外灯 ( 365 nm) 下检视，。当采用 2015 年版 《中国 药典》展开剂，即甲苯-乙酸乙酯-甲酸 ( 9 ∶ 4 ∶ 1) 时，薄 层图谱上半部分成分未能很好展开; 展开剂为环己烷-乙酸 乙酯-甲酸 ( 7 ∶ 6 ∶ 1) 时，薄层色谱图中上半部分成分的 分离有所改善; 当展开剂为环己烷-乙酸乙酯-甲酸 ( 4 ∶ 5 ∶ 1) 时，薄层色谱图中大部分成分均能得到很好分离， 比移值适中，而且环己烷毒性比甲苯小，故采用环己烷-乙 酸乙酯-甲酸 ( 4 ∶ 5 ∶ 1) 作为展开剂。

参照薄层色谱法 ( 2015 年版 《中 国药典》一部附录Ⅵ B) 试验，吸取供试品、对照品、对 照药材溶液各 2 μL，分别点于同一硅胶 G60 高效薄层板 上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸 ( 4 ∶ 5 ∶ 1) 为展开剂，展 开，取出，晾干，置紫外灯 ( 365 nm) 下检视。结果供试品色谱在与对照药材、对照品相应位置上显示相同颜色 的荧光斑点。

取药材供试品溶液 ( S7) 、异嗪皮啶 对照 品 溶 液 ( 0. 5 mg /mL ) 、 迷迭香酸对照品溶液 ( 0. 5 mg /mL) 、对照药材溶液各 2 μL，在 “2. 4”项条件下展开，表明供试品色谱在与对照药材、对 照品相应位置上显示相同颜色的荧光斑点。置氨蒸汽中熏 10 min时，与对照品色谱相应的斑点变为黄绿色，即异嗪 皮啶，表明方法专属性良好。

考察了用石油醚、甲醇、水超声提 取后肿节风的薄层色谱图，结果表明用有机溶剂提取后色 谱图上部分可看到许多红色荧光斑点，提示色素类成分较 多; 采用水提取处理时背景较为干净，杂质斑点干扰较少， 故选择该方法。

前期比较了点样量 1、2、4、8、10 μL， 发现 1 μL 时部分斑点不清晰，而超过 2 μL 时色谱峰出现 超载现象，分离度较差，故选择点样 2 μL。

比较不同温度 ( 4、25 ℃ ) 下 的薄层色谱图，结果表明温度对薄层色谱无显著性影响。 然后，比较不同相对湿度 ( 20%、72%) 下的薄层色谱图，结果表明随着相对湿度的增大，色谱图上半部分分离度有 所下降，提示实际操作过程中应注意控制相对湿度。

采用高效薄层板的色谱图中， 异嗪皮啶对照品在 365 nm 下可检测到 2 个斑点，而在普通 TLC 板中只看到 1 个，一方面提示该对照品可能存在杂质 或者同分异构体，另一方面则提示 HPTLC 法分离度更高。 另外，肉眼观察比移值较低的斑点面积较大，为进一步确 证，将薄层板置氨蒸汽中熏 10 min，再在 365 nm 下检视， 发现对照品色谱相应的斑点变为黄绿色，即异嗪皮啶，从 而确证比移值较低的斑点为异嗪皮啶。

HPTLC 法采用更细、更均匀的改性 硅胶和纤维素作为固定相，其分离度和灵敏度明显优于普 通 TLC 法。该方法主斑点清晰，易于检出，专属性强， 灵敏度高，稳定性好，同时检测了指标成分异嗪皮啶和抗 炎活性成分迷迭香酸，能更全面地反映肿节风质量。