昆山超声清洗器在玉米须不同溶剂提取物的抗氧

在人体新陈代谢过程中会产量大量的自由基， 它们具有强氧化性，会造成人体内生物膜及细胞功 能的伤害，进而加大心血管疾病及癌症发生的风 险，同时还会加快人体衰老的进程。有研究发现， 抗氧化剂具有明显清除自由基的能力，能够减少其 对人体的危害。近些年，随着人们安全意识的逐 渐增强，开发绿色高效的天然抗氧化剂已成为研究 的热点。玉米须是玉米的花柱和柱头，资源丰富， 含有多种功能性成分，具有降血压、降血脂、抗氧 化、抗肿瘤等功能，其中，玉米须中含有的多酚和 黄酮类物质发挥着一定的功效。

本试验以玉米须为原料，采用超声辅助浸提 法，研究不同提取溶剂对玉米须提取物的含量及其抗氧化活性的影响，旨在选出超声辅助提取的最佳 溶剂，进一步为天然无毒抗氧化剂的开发提供理论 基础，同时对玉米副产物的综合开发利用具有一定 的实践参考价值。

供试玉米须采集于绥化市田间，将其干燥、粉 碎、过 0.59 mm 筛，备用。 没食子酸标准品 （天津市光复精细化工研究 所）；芦丁标准品（上海源叶生物科技有限公司）；福 林酚试剂 （国药集团化学试剂有限公司）；1，1- 二 苯基 -2- 苦基肼 （DPPH）（分析纯）（美国 Sigma 公司）；2，2- 联氮 - 双 -（3- 乙基苯并噻唑 -6- 磺酸） （ABTS）（湖南汇百特生物科技有限公司）；亚硝酸 钠、硝酸铝、氢氧化钠、碳酸钠、三氯乙酸、氯化铁、 硫酸亚铁等均为国产分析纯。

TU-1901 双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；KQ-200VDE 双频数控 超声波清洗器 （昆山市超声仪器有限公司）；80-2B 台式离心机（湖南星科科学仪器有限公司）；HH-6 数 显恒温水浴锅（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公 司）；RE-52A 旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）。

称取玉米须 3 g，按料液比 1∶ 15（g/mL）分别加入蒸馏水、甲醇、70%甲醇、50%甲 醇、乙醇、70%乙醇和 50%乙醇的溶剂混匀后进行超 声辅助提取，设定超声温度 60 ℃，超声时间 40 min； 超声提取结束后，3 500 r/min 离心 10 min，滤渣按 上述方法再进一步提取，合并 2 次滤液，旋转蒸发 浓缩，滤液定容到 50 mL 容量瓶中，低温保存，备用。

采用福林酚比色法测 定总多酚含量。以没食子酸为标准品，在最大吸收 波长 760 nm 处测定不同浓度标准品的吸光度，制 作标准曲线，得到回归方程 y＝5.195 4x－0.168 （R2 ＝0.992 1）。取 5 mL 不同溶剂的提取物，依标准 曲线的方法测定不同溶剂提取物的吸光值，计算各 提取溶剂提取物中多酚的含量，结果以各提取物中 含有相当没食子酸的毫克数表示（mg/g）。

采用硝酸铝比色法测 定总黄酮含量。以芦丁作为标准品，在 510 nm 处 测定不同浓度标准品的吸光度，绘制标准曲线，得 到回归方程 y＝4.571 4x＋0.047 2（R2 ＝0.995 6）。取 5 mL 不同溶剂提取物，依标准曲线的方法测定不 同溶剂提取物的吸光值，计算其黄酮含量，结果以 各提取物中含有相当芦丁的毫克数表示（mg/g）。

还原能力的测定采用 吸光值法；参照 MA 等的方法测定 1，1- 二苯 基 -2- 苦肼基自由基（DPPH·）的清除能力；参照 XIANG 等的方法测定超氧自由基（O2 ·）的清除能 力；参照 CHEN 等的方法测定羟自由基（·OH）的 清除能力；参照 LI 等的方法测定 2，2- 联氮 - 二 （3- 乙基 - 苯并噻唑 -6- 磺酸）二铵盐（ABTS+ ·）自 由基的清除能力。 1.4 数据处理 每个试验都重复 3 次，计算结果以均值±标准·1140·差表示，采用 Excel 2010 作图，差异显著性分析采 用 Statistix 8.0 软件，相关性分析采用 SPSS 软件进行。

由表 1 可知，不同溶剂提取物中总黄酮和总多 酚的含量存在一定的差异。总黄酮含量在不同溶剂 提取液中约为 0.25～0.65 mg/g，其中，70%乙醇中的 总黄酮含量最高；其次为蒸馏水，但其与 70%乙醇 间差异不显著（P＞0.05）；含量最低的为 50%甲醇 提取剂，总黄酮含量为（0.25±0.02）mg/g。玉米须不 同溶剂提取物中总多酚含量为 0.41～0.79 mg/g，其 中，以 70%乙醇为溶剂时提取物中的总多酚含量较 高，而以甲醇为溶剂的提取物中的总多酚含量最 低。综合分析可知，提取玉米须的总黄酮和总多酚 适于采用 70%的乙醇作为提取溶剂。华艳宏等研 究也发现，藜麦种子中的总黄酮和总多酚利用 70% 的乙醇作为提取溶剂时，提取量较高。

2.2 不同溶剂提取物抗氧化活性分析

2.2.1 不同溶剂提取物的还原能力分析

还原能 力和抗氧化能力成正比关系，即还原能力越强抗氧 化能力越强，因此，还原能力大小能够表征不同 溶剂提取物的抗氧化活性大小。有研究报道，具有 抗氧化性的物质能将铁氰化钾还原，得到的还原产 物再与三氯化铁反应生成有色物质，在 700 nm 处 有最大吸光度，吸光度越大，说明生成的有色物质 越多，即还原能力越强。不同溶 剂提取物中的总黄酮和总多酚对铁均具有一定的 还原能力，但存在一定的差异，其中，以 70%甲醇作 为提取剂时还原能力最高，但与 70%乙醇间差异不 显著（P＞0.05）；蒸馏水提取物的还原能力最弱；甲 醇与乙醇提取物的还原能力显著高于蒸馏水 （P＜ 0.05），但二者间差异不显著（P＞0.05）。

DPPH 自由基是一种很稳定的以氮为中心的自由基，清除方法操作简便，常作为抗氧化能力的 评价指标。DPPH 自由基清除率越高，抗氧化能力 越强。不同溶剂提取物在一定程度上 均可以清除 DPPH 自由基，提取溶剂为 70%乙醇 时，清除能力显著高于其他溶剂（P＜0.05）；70%甲 醇提取物的清除能力次之；50%甲醇、乙醇以及蒸 馏水作为溶剂时的提取物，其清除率集中在 61%～ 65%，差异不显著（P＞0.05）；甲醇作为提取溶剂时， 表现出的清除能力最弱。

本研究表明，不同溶剂玉米须提取物中的总多 酚和总黄酮含量不同，而且本研究采用还原力、 DPPH 自由基、超氧自由基、羟基自由基以及 ABTS 自由基清除率对不同溶剂提取物的抗氧化能力进 行了比较，结果发现，采用 70%乙醇作为溶剂得到 的提取物抗氧化能力最强，其次为 70%甲醇提取 物。提取物中的总多酚和总黄酮含量与抗氧化能力 之间的相关性分析表明，总多酚与抗氧化能力之间 相关性显著，而总黄酮与抗氧化能力之间的相关性 较差。同时，5 种抗氧化评价指标之间的相关性表 明，不同抗氧化体系之间并不都呈正相关。这可能 是由于不同溶剂提取物中起抗氧化作用物质的结 构和性质不同，以及由 5 种抗氧化评价指标的反 应机制不同所致。结果证实，70%乙醇玉米须提取 物具有较高的抗氧化能力，该研究结果为超声辅助 提取溶剂的选择提供了理论基础，同时为抗氧化功 能食品等领域的开发应用及抗氧化机制的研究奠 定了理论参考