CUMS抑郁失眠小鼠的影响分析（KQ-200KBD使用）

抑郁症（Depression）是一种较为常见的情绪障碍 综合征，其由多种生物学异常体征、症状组成，患 者主要表现为显著持久的心境低落、悲观厌世、思 维及认知迟缓，并伴随失眠等睡眠障碍，有些患者 甚至有自杀倾向。全球重度抑郁症发病率为 4.4%， 中国发病率为 3.02%，世界卫生组织（WHO）已将重 度抑郁症列为全球第三大疾病负担。目前，该疾病 的治疗主要以西药为主，如氟西汀、文拉法辛、度 洛西汀等，但存在临床治愈率低、残留症状突出、 复发率高、易导致脏器功能紊乱等不足，使其临床 应用受到限制。越来越多研究表明，中药及其复方 制剂在治疗抑郁症方面表现出独特的效果和优势。

1 材料

1.1 动物

健康雄性 ICR 小鼠，SPF 级，体质量（21± 2）g，购于北京华阜康生物科技公司，动物生产许可 证号：SCXK（京） 2014-0004。饲养环境：室温（22± 2）℃，相对湿度 65%～70%，光照 12 h，自由饮食、 摄水。

1.2 药品及试剂

SHF 皂苷部位提取物，由本课题组 制备；白桦脂醇（批号：PS14072405）、白桦脂酸（批号：PS10052503，纯度 ≥ 98%），成都普思生物 科技有限公司；解郁安神颗粒（批号：20170103075）， 吉林百姓堂药业有限公司；盐酸文拉法辛胶囊（规 格：25 mg，批号：171003），成都康弘药业集团股 份有限公司。戊巴比妥钠，山东西亚化学工业有限 公 司 ； 重 酒 石 酸 去 甲 肾 上 腺 素 - 水 合 物（批 号 ： 100169-199402），中国食品药品检定研究院；5-HT （批号：157728）、邻苯二甲醛，北京百灵威科技公 司；多巴胺盐酸盐（批号：A0305），梯希爱（上海）化 成 工 业 发 展 有 限 公 司 ； L- 半 胱 氨 酸（批 号 ： 2010129），天津市博迪化工有限公司；高碘酸钠（批 号 ： 20100715）， 天 津 市 大 茂 化 学 试 剂 厂 ； 盐 酸 （AR），北京化工厂；正庚烷、碘、EDTA-2Na、无 水亚硫酸钠、磷酸氢二钾、氢氧化钠、醋酸、醋酸 钠、碘化钾等（AR），天津基准化学试剂有限公司。

1.3 主要仪器

AUX120 型十万分之一分析天平、 RF- 5301PC 型荧光分光光度计，日本岛津公司； 昆山舒美KQ-200KBD 型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限 公司；超纯水机（Millipore Ultra-pure Water），美国 密理博公司；TD5A-WS 型台式低速离心机，长沙湘 仪离心机仪器有限公司。

2 方法

2.1 分组、模型复制及给药

小鼠随机分成 7 组，每 组 10 只，分别为空白组（蒸馏水，10 mL·kg-1 ）、模 型对照组（蒸馏水，10 mL·kg-1 ）、文拉法辛组（9.38 mg·kg- 1 ）、解郁安神组（650 mg·kg- 1 ）、SHF 皂苷组 （30 mg·kg-1 ）、白桦脂醇组（4 mg·kg-1 ）和白桦脂酸组 （12 mg·kg- 1 ）。各组小鼠在适应环境 3 d 后开始造 模。从造模的第 1 天开始，每天 8: 00~8: 30 灌胃给药，持续 21 d。以禁食 24 h、禁水 24 h、夹尾、昼 夜颠倒、冷热水游泳、睡眠剥夺等 10 种应激因素， 21 d 内随机安排，每天给予任意 2 种刺激（造模日程 表略）。每种刺激不可连续出现，使动物不可预见给 予 的 刺 激 ， 以 此 来 复 制 慢 性 不 可 预 期 温 和 应 激 （CUMS）抑郁失眠小鼠模型。

2.2 指标检测

各组小鼠的抑郁及睡眠情况通过国际 公认的行为学观测实验结果来反馈，作用机制的假 设则通过检测各组小鼠脑组织的单胺类神经递质的 含量来验证。

2.2.1 悬尾实验

（TST） 于测试当日给药后 1 h，将小 鼠尾部固定在一水平木棍上，使其呈倒挂状态，四 周用纸板隔开小鼠视线。具体操作步骤及评价标准。实验共进行 6 min，前 2 min 为适应时 间，记录后 4 min 内小鼠的 TST 不动时间，即失望时间。

2.2.2 强迫游泳实验

（FST） 于测试当日给药后 1 h， 将小鼠单独放入透明玻璃缸中。玻璃缸置于安静的 房间，保持适宜的水深及水温。具体操作步骤及评 价标准 。实验共进行 6 min，前 2 min 为 适应时间，记录后 4 min 内实验小鼠的 FST 不动时 间。单只小鼠实验结束后，清洗玻璃缸。

2.2.3 阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠实验

于测试 当日给药后 30 min，不同组别小鼠腹腔注射阈上剂 量（40 mg·kg-1 ）戊巴比妥钠。注射后开始计时，记录 睡眠潜伏期及睡眠时间。睡眠起始时间为翻正反射 消失时间，睡眠结束时间为翻正反射恢复时间，期 间即为小鼠睡眠时间，睡眠时间＞60 min 的小鼠， 按 60 min 记录。腹腔注射至睡眠起始时间为睡眠潜 伏期，潜伏期超过 15 min 的小鼠，按 15 min 记录。

2.2.4 脑组织单胺类神经递质含量测定

不同组别小 鼠于末次给药后 30 min，除空白组外，其他各组小 鼠均给予 1 min 悬尾刺激；刺激后立即断头处死小 鼠，分别取海马及大脑皮层组织于 2 个 EP 管中。采 用荧光分光光度法在指定波长下测定小鼠脑组织中 海 马 及 皮 层 区 域 的 多 巴 胺（DA）、 去 甲 肾 上 腺 素 （NE）、 5- 羟 色 胺（5- HT）的 含 量 ， 计 算 ： 含 量 （ng·g-1 ）=（F 样品－F 组织空白）（/ F 标准品－F 试剂空白）×C 标准品× V 标准品×1.5×1/m 脑组织，F 表示荧光强度，C 表示液体浓 度，V 表示液体体积。 2.3 统计学处理方法 采用 SPSS 21.0 统计软件进行 数据分析；计量资料以均数±标准差（x ± s）表示；多 组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA）， 两两比较采用 LSD 检验；以 P < 0.05 为差异有统计学意义。

3 结果

与空白组 比较，模型对照组的 TST 不动时间明显增加（P< 0.01）。与模型对照组比较，文拉法辛组、解郁安神 组、SHF 皂苷组小鼠的 TST 不动时间显著减少，差 异具有统计学意义（P < 0.01）；白桦脂醇组、白桦脂 酸组的 TST 不动时间虽有降低，但差异无统计学意 义（P > 0.05）。结果表明，SHF 皂苷可以通过 TST 指 标表现出一定的抗抑郁作用。与空白组 比较，模型对照组的 FST 不动时间明显增加（P < 0.05）。与模型对照组相比，文拉法辛组、解郁安神 组、SHF 皂苷组、白桦脂酸组小鼠的 FST 不动时间 显著减少，差异具有统计学意义（P < 0.05，P < 0.01）。结果表明，SHF 皂苷及白桦脂酸在 FST 指标 上表现出抗抑郁作用。与空白组比较， 模型对照组的睡眠潜伏期显著延长（P < 0.01），睡眠 时间缩短，但差异无统计学意义（P > 0.05）。与模型 对照组比较，各给药组小鼠的睡眠潜伏期时间均显 著缩短（P < 0.01）；文拉法辛组、解郁安神组、SHF 皂苷组及白桦脂酸组的小鼠阈上剂量戊巴比妥钠所 致 睡 眠 时 间 明 显 延 长 ， 差 异 有 统 计 学 意 义（P < 0.05，P < 0.01）。结果表明，SHF 皂苷及白桦脂醇、 白桦脂酸可能与戊巴比妥钠存在协同作用，可缩短睡眠潜伏期。SHF 皂苷及白桦脂酸还在一定程度具 有延长睡眠时间的作用。

4 讨论

抑郁症的发病机制至今尚未完全明了，近年来临 床上出现多种有关该病发病机制的理论或学说，如 去甲肾上腺素假说、多巴胺假说、神经可塑性通路 调节学说等，虽然观点不一，但都认为抑郁症的发 生与外界压力刺激相关。抑郁症相关研究在建立动 物实验模型时，基本都通过不同的应激刺激来实 现。CUMS 抑郁失眠模型是国际上得到普遍认可的抑 郁动物模型之一，通过随机给予啮齿类动物不同的不具威胁性的应激因素，来模拟因外界压力使实验 动物产生与抑郁症患者类似的行为。



 

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