纯化黄精总皂苷提取物工艺(KQ-AS-1000GVDE使用)

黄精（Polygonatum sibiricum Red.）为百合科黄 精属多年草本植物，富含甾体皂苷、糖类、醌类、氨 基酸和微量元素等化学物质，其干燥根茎可药用，具 有补气养阴、健脾益肾之功效。现代药理学大量研 究表明黄精皂苷具有调节人体血糖、拮抗肿瘤、保护 缺血心肌细胞、增强人体免疫力和改善学习和记忆作 用，使得近年以其为原料的保健食品在各类市场销 售日益火爆。虽然前人已对其提取、分离开展大量研 究，但提取物中杂质仍然影响其保健功效的发挥。

1　材料与方法

1.1　材料与试剂

黄精材料（云南楚雄和康中草药有限公司，经广 西药用植物园鉴定为百合科黄精属黄精根茎）。 薯蓣皂苷元标准品（批号11539，定量分析用， 中国食品药品检定研究院）；乙醇、石油醚、香草 醛、高氯酸、冰醋酸、正丁醇、甲醇（分析纯，国药 集团化学试剂有限公司）；试验用水为二次纯化水。

1.2　仪器与设备

WF-20 B型高速多功能粉碎机（江阴市中恒元机 械制造有限公司）；AE 224型电子天平（上海舜宇恒 平科学仪器有限公司）；RE-52 S型旋转蒸发仪（上 海亚荣生化仪器厂）；昆山舒美KQ-AS-1000GVDE型双频恒 温数控超声机（昆山舒美超声仪器有限公司）；L6S 型紫外-可见分光光度计（上海仪电分析仪器有限公 司）；微量移液器（赛默飞世尔科技（中国）有限 公司）；FD-1 B-50型冷冻干燥机（上海比朗仪器制 造有限公司）；水浴恒温振荡器（常州市神科仪器 厂）；AB-8型大孔树脂（天津市西金纳环保材料科 技有限公司）；D-101、XDA-5型大孔树脂（天津浩 聚树脂科技有限公司）；LSA-10、LSA-30、LSA-40 型大孔树脂（陕西蓝深特种树脂有限公司）。

1.3　方法

1.3.1　提取物制备

取干燥的黄精根茎粉碎至完全，过65目筛，称取 10 g，加入200 mL石油醚置于超声装置内于40 ℃超声 40 min后过滤，滤渣加入80 mL、80%乙醇溶液溶解 后，于40 ℃继续超声40 min过滤，滤液蒸干，加入0.5 mol/L、100 mL盐酸溶解后，置于分液漏斗，分别加入 80 mL正丁醇提取3次，合并正丁醇，蒸干，冷冻干燥 备用。

1.3.2　标准曲线

精密称取干燥恒质量的薯蓣皂苷元标准品0.010 0 g，采用甲醇稀释至1.0 mg/mL，分别移取0.05，0.10， 0.30，0.50和2.00 mL至具塞试管内，水浴蒸干甲醇 后，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL和0.8 mL高氯 酸，摇匀置于水浴中加热15 min后，加入5 mL冰醋 酸，摇匀，以相应试剂作空白，于560 nm最大吸收 波长处测定吸光度，绘制薯蓣皂苷浓度（X）-吸光 度（Y）的标准曲线，线性方程为y=0.126x+0.011 7 （r=0.996 4），可知皂苷质量浓度于0.008 3~0.33 mg/ mL范围内，吸光度与其呈良好线性关系。

2　结果与分析

准确称取黄精皂苷提取物0.50 g，采用甲醇溶液 定容于10 mL容量瓶中，精密移取1 mL至具塞试管 内，水浴蒸干甲醇后，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL和0.8 mL高氯酸，摇匀置于水浴中加热15 min，另加 入5 mL冰醋酸，摇匀，以相应试剂作空白，于560 nm 波长处测定吸光度，平行测定3次，代入标准曲线 方程，计算提取物中总皂苷含量。AB-8型大孔树脂静态吸附-洗脱黄 精皂苷类化合物的回收率高于其他5种树脂，达到 73.18%。这可能归因于皂苷类化合物结构主要含有糖 基，如半乳糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸及海藻糖等，而 AB-8型大孔树脂特殊的非极性空间结构，恰好能与 其产生较好的物理吸附作用，因此选择AB-8型大孔 树脂作为纯化黄精皂苷提取物的吸附树脂。上样液质量浓度0.5 mg/mL时，树脂 对黄精皂苷的吸附率达到86.8%，继续增大上样液浓 度，吸附率开始下降，因此选择0.3，0.5和0.7 mg/mL 作为上样液质量浓度的响应因素水平。流出液中皂苷浓度为上样液浓度的10%，称为树 脂吸附泄漏点，而达到上样液浓度的100%时则称为 树脂吸附饱和点，不同上样液体积对树脂吸附皂苷 的影响。

3　结论

以紫外-可见分光光度法为定量分析手段，通过 考察不同型号大孔树脂的静态吸附-洗脱性能和单因素改变影响，对上样液浓度、上样流速、洗脱液浓 度、洗脱流速进行三水平四因素的响应面优化，利用 Design-Expert 8.0软件分析，得到大孔树脂纯化黄精 皂苷提取物的最佳工艺条件为：体积60 mL的0.57 mg/ mL黄精总皂苷提取液，以2.0 mL/min流速上样至AB-8 型大孔树脂内，随后采用体积为90 mL的80.81%乙醇 溶液，以1.62 mL/min流速洗脱，黄精皂苷回收率为 73.62%，纯化后产物中总皂苷含量为纯化前2.71倍。

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