测定钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的含量（KQ-250DB使用

中药钩藤为茜草科植物钩藤[Uncaria rhynchophylla（Miq.）Miq. exHavil.]、大叶钩藤（Uncaria macrophylla Wall.）、毛钩藤（Uncaria hirsuta Havil.）、华钩藤[Uncaria sinensis（Oliv.）Havil.]或无柄果钩藤（Uncaria sessilifructus Roxb.）的干燥带钩茎枝，多于秋、冬二季采收， 去叶，切段，晒干 。钩藤，原名“钓藤”，始载于《名医别 录》，主要用于肝风内动、惊痫抽搐、高热惊厥、感冒夹 惊、小儿惊啼、妊娠子痫、头痛眩晕 。其主要化学成分 有生物碱、三萜、木脂素、黄酮等成分 ，尤以生物碱在 钩藤中含量较多 ，其中钩藤碱（Rhynchophylline）含量 占总碱的28％～50％，异钩藤碱（Isorhynchophylline）含 量约占总碱的15％，二者具有显著的降压、镇静、安眠、 解痉等作用 ，因此，笔者选择以钩藤碱和异钩藤碱作 为钩藤质量评价指标能较有效地控制其药材质量。

1 材料

1.1 仪器

Agilent 1260 HPLC仪（美国Agilent公司）；Shimadzu LC-20AT HPLC 仪（日本岛津公司）；Waters e26953 HPLC 仪（美国 Waters 公司）；Dikmatech Diamonsil PlusC18（美国 Dikma Technologies 公司，250 mm×4.6 mm，5 μm，柱号：2509215，）；Hypersil ODS C18（大连依利特分 析仪器有限公司，柱号：2912645，250 mm ×4.6 mm，5 μm）；Agilent HC- C18（美国Agilent Technologies公司，柱 号：538639，250 mm×4.6 mm，5 μm）；MS105DU 十万分 之一天平（瑞士Mettler tolerdo公司）；昆山舒美KQ-250DB数控超 声波清洗器（江苏省昆山市超声仪器有限公司）； PHS-25 PH计（上海霄盛仪器制造有限公司）；FY-1H旋 片式真空泵（浙江飞越机电有限公司）；103B 200 g高速 中药粉碎机（浙江省瑞安市永历制药机械有限公司）。

1.2 药品与试剂

试验用药材采收于江西省的安义、资溪、黎川、宁都 4个县，每个县各采了2批，安义县批号：181205、181206， 资 溪 县 批 号 ：181208、181209，黎 川 县 批 号 ：181211、 181212，宁都县批号：181214、181215，上述各药材均为野 生，采收时间为2018年12月，经江西省中医药研究院虞 金宝研究员鉴定为钩藤；钩藤碱对照品（批号：B20453， 纯度：≥98％）、异钩藤碱对照品（批号：B21526，纯度：≥ 98％）、C4mimCl（批号：S50839，纯度：≥97％），均购于上 海源叶生物科技有限公司；乙腈和甲醇均为色谱纯，磷 酸、三乙胺、氢氧化钠、乙醇均为分析纯，水为娃哈哈纯 净水（杭州娃哈哈集团有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Dikmatech Diamonsil Plus C18（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-缓冲液（0.1％磷酸+ 3.0 mmol/L C4mimCl 或 3.0 mol/L 三乙胺）（B），pH 约为 2.3；检测波长：245 nm；流速：1 mL/min；柱温：25 ℃；进 样量：10 μL；梯度洗脱（0～15 min，8％→35％A；15～17 min，35％→43％A；17～19 min，43％→44％A；19～30 min，44％→90％）。

2.2 混合对照品溶液的制备

精密称取钩藤碱 12.16 mg 和异钩藤碱 9.92 mg，分 别置于10 mL量瓶中，加乙醇溶解并定容，摇匀，得钩藤 碱对照品贮备液和异钩藤碱对照品贮备液。再精密吸 取钩藤碱对照品贮备液1 mL和异钩藤碱对照品贮备液 2 mL 置于 100 mL 量瓶中，加 60％甲醇稀释至刻度，摇 匀，制成每1 mL分别含钩藤碱12.16 μg、异钩藤碱19.84 μg的混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

分别取过 3 号筛的钩藤粉末约 0.5 g，精密称定，置 于具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇50 mL，称定质量， 室温浸泡1 h；然后超声提取30 min（功率：250 W，频率： 40 kHz），放冷，再称定质量，用60％甲醇补足减失的质 量，摇匀，滤过，取续滤液，0.22 μm微孔滤膜过滤，得供 试品溶液。

2.4 流动相添加剂的选择

按照“2.1”项下色谱条件，取批号为181206的安义县钩藤供试品溶 液进样，比较不含添加剂的流动相以及在流动相中添加 剂分别为三乙胺（3.0 mmol/L）和 C4mimCl（3.0 mmol/L） 时的分离效果。

3 讨论

3.1 检测波长

通过光谱全波长扫描发现，钩藤碱和异钩藤碱在检 测波长为245 nm波长处均有最大吸收，因此将检测波长 定为245 nm。

3.2 有机相的选择

分别考察相同有机相比例下甲醇和乙腈对2种成分 分离效果的影响。结果发现，与乙腈为有机相比较，用 甲醇时钩藤碱和异钩藤碱出峰时间延后近 7 min，且峰 形较差，因此本试验选用乙腈为有机相。

3.3 含量测定结果分析

本试验采用离子液体 C4mimCl 做流动相添加剂测 定了江西不同产地的野生钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的 含量，江西不同产地野生钩藤中均含有钩藤 碱和异钩藤碱，但各产地样品中钩藤碱和异钩藤碱的含 量差异均较大，来自赣北地区（安义县）的钩藤碱和异钩 藤碱含量相对较高，笔者推测气候环境、土壤性质对野生钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的含量有一定影响。后期， 笔者将收集江西更多产地的野生钩藤、栽培钩藤、野生 抚育钩藤对其有效成分含量进行测定，为江西钩藤药材 合理布局与生产管理提供依据。



 

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