测定银翘解毒丸中5种成分(KQ-500DV使用)

银翘解毒丸处方源于银翘散，银翘 散出自我国清代著名医家吴瑭所著的《温 病条辨》一书，演变于金元四大医学家之一李东垣的清心凉膈散。原文记载的本 方药物组成为“银花一两，连翘一两，苦 桔梗六钱，薄荷六钱，竹叶四钱，生甘草 五钱，荆芥穗四钱，淡豆豉五钱，牛蒡子 六钱，用鲜芦根汤煎煮后服用”。

1 仪器

XS205DU电子天平（0.01mg，美国 梅特勒公司）；昆山舒美KQ-500DV 超声波清洗器 （昆山市超声仪器有限公司）；LC-20A 高效液相色谱仪（配置在线真空脱气装 置、四元梯度泵、自动进样器、柱恒温 箱、SPD-20A紫外检测器，日本岛津公 司）。

2 试药

绿原酸（含量96.6%，批号110753- 201314）、连翘苷（含量95.3%，批号 110821-201213）、牛蒡苷（含量95.7%， 批号110819-201309）、甘草苷（含量 93.7%，批号111610-201106）、甘草酸 铵（含量92.6%，批号110731-201317）对 照品均购自中国食品药品检定研究院；银 翘解毒丸（水蜜丸）（每100粒重10g）购 自北京同仁堂科技发展股份有限公司制药 厂；甲醇、乙腈均为色谱纯（美国Fisher Scientific公司）；水为超纯水。

3 方法与结果

3.1 色谱条件

ThermoC18色谱柱（4.6mm ×250mm，5μm），流动相A为乙腈，B为0.5%磷酸，梯度洗脱（0～8min，5%A；8～12min，5%→15%A； 12～30min，15%A；30～50min， 15%→40%A；50～60min，40%→60%A； 60～70min，60%→100%A；70～80min， 100%→5%A），体积流量0.8mL/min；检 测波长230nm；柱温25℃；进样量供试品 溶液10μL，对照品溶液5μL。

3.2 对照品溶液制备

精密称取连翘苷对 照品5.42mg置10mL量瓶中，用甲醇溶解 并稀释至刻度，摇匀，制成连翘苷对照 品贮备液；再分别精密称取绿原酸对照 品8.14mg，牛蒡苷对照品10.12mg，甘草 苷对照品2.51mg，甘草酸铵对照品7.91mg 置同一50mL量瓶中，并精密加入上述 连翘苷对照品贮备液1mL，用甲醇溶解 并稀释至刻度，摇匀，即得每1mL含绿 原酸0.1573mg，连翘苷0.0103mg，牛蒡 苷0.1937mg，甘草苷0.0470mg，甘草酸 0.1435mg（甘草酸重量=甘草酸铵重量 /1.0207）的混合对照品溶液。

3.3 供试品溶液制备

取银翘解毒丸（水 蜜丸）适量，研细，取约1.0g，精密称 定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲 醇25mL，密塞，称定重量，超声提取 30min，放冷，用70%甲醇补足减失的重 量，摇匀，滤过（0.45μm微孔滤膜），取 续滤液作为供试品溶液。 3.4 阴性样品溶液制备 按银翘解毒丸（水 蜜丸）处方及工艺，制备金银花阴性样 品、连翘阴性样品、牛蒡子阴性样品和甘 草阴性样品，再按“3.3”项下方法分别制 备金银花阴性供试品溶液、连翘阴性供试 品溶液、牛蒡子阴性供试品溶液和甘草阴 性供试品溶液。

4 讨论

4.1 流动相选择

在流动相的选择上， 选取乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸溶液、乙 腈-0.2%磷酸溶液、乙腈-0.5%磷酸溶液 等溶剂系统，分别测定同一供试品溶液中 5种被测成分的峰面积。在乙腈-0.5%磷 酸溶液流动相系统，梯度洗脱的色谱条 件下，绿原酸、牛蒡苷、连翘苷、甘草 苷和甘草酸分离效果良好，峰形较好， 在60min 内就能实现良好的分离。确定乙 腈-0.5%磷酸溶液为流动相系统。

4.2 检测波长选择

在检测波长的选择上， 取5种被检测成分绿原酸、连翘苷、牛蒡苷、甘草苷和甘草酸（以甘草酸铵计）的 对照品，分别加甲醇配制成对照品溶液， 在200～400nm波长范围内扫描测定紫外吸 收光谱，测得各成分的最大吸收波长，通 过分析比较，选取230nm、250nm、280nm 作为备选检测波长。在备选检测波长下分 别测定同一供试品溶液中5种被测成分的 峰面积。为保证5种被测成分均有较大吸 收，确定检测波长为230nm。

4.3 柱温选择

分别考察了25℃、30℃、 40℃柱温时对样品峰形、保留时间、分离 度的影响，最终选择25℃作为最佳柱温。

5 结论

该实验采用HPLC法同时测定银翘解 毒丸（水蜜丸）中绿原酸、连翘苷、牛蒡 苷、甘草苷、甘草酸含量的方法，操作简 便、专属性强、结果可靠，能快速、直观 和全面地反映银翘解毒丸（水蜜丸）内在 质量，可应用于银翘解毒丸（水蜜丸）的 质量控制及生产过程质量控制。



 

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