林蛙抗菌肽脂质体处方筛选-KQ-250E使用

林蛙抗菌肽具有高效、光谱抗菌作用，不仅对化 脓菌、白色念珠菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿 脓杆菌等具有很强的抑制作用，对革兰氏阳性菌、阴 性菌都有抑制作用，具有高效、广谱抗菌的特点。 研究表明林蛙皮中的抗菌活性还具有一定的抗炎、镇 痛作用，是极具开发研究前景的良好抗菌药物。

1 实验材料

1.1 实验药品与试剂

磷脂（北京美亚斯磷脂技术有 限公司），胆固醇（北京鼎国生物技术发展中心），磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、无水乙醇、冰醋酸等药品 均为国产分析纯。

1.2 实验仪器

RE-52AA 型旋转蒸发器（上海雅荣生 化设备仪器有限公司），QL-991 Vortex（上海其林贝 尔仪器制造有限公司），昆山舒美KQ-250E 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），透皮吸收检测仪（天津市 正通科技有限公司），电热恒温水浴锅（上海精宏实 验设备有限公司），Zetasizer 纳米粒度电位仪（英国马尔文仪器有限公司），微孔板分光光度计（美国伯 腾仪器有限公司），BP221S 电子天平（statorius）。

2 方法与结果

2.1 林蛙抗菌肽脂质体的制备

采用薄膜分散法制备。初步称取 30 mg 磷脂、10 mg 胆固醇、10 mg 林蛙抗菌肽并加入 5 mL 无水乙醇在 30℃水浴预热后 在磁力搅拌器中充分溶解混匀，然后 35℃水浴下旋转 蒸发将乙醇完全挥发，然后继续抽滤直到烧瓶壁上有 一层均匀的薄膜；之后加入 20 mL 的 PBS（PH 6.8）继 续旋转蒸发至瓶壁上的脂质完全溶解，浓缩至 10 mL 的均一悬浊液，将混悬液于超声仪上冰浴超声 5 min 后于 4℃避光保存。

2.1.1 林蛙抗菌肽脂质体的粒径大小的测量

利用 Zetasizer 纳米粒度电位仪测定脂质体的粒径。见图 1。

林蛙抗菌肽脂质体粒径大小为 399.1 nm，脂质体 大小合适，PDI 为 0.003<<0.1，说明采用薄膜分散法制 备的脂质体大小分布均匀且大小合适。

2.1.2 脂质体的形态

将制备的脂质体通过扫描电镜。 在扫描电镜下的林蛙抗菌肽脂质体形态均匀，分散度 较好，大小与 Zetasizer 纳米粒度电位仪测量的结果基 本一致，见图 2。

2.2 林蛙抗菌肽脂质体包封率的测定

采用BCA法测 定包封率。精密称取 4 mg BSA 标准品加入 1 mL 去离 子水配成 4 mg/mL 的母液，将母液稀释成 2 mg/mL、 1 mg/mL、0.5 mg/mL、0.25 mg/mL、0.125 mg/mL、 0 mg/mL，利用酶标仪在 562 nm 处测量比色，以牛血 清白蛋白含量为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标 准曲线，得到直线回归方程为Y = 0.3092 X+0.0071，R2 = 0.999 5，可信度较高。取 2.1 中制得的脂质体在酶 标仪中测量游离药物的吸光度，利用标准曲线回归方 程计算游离药物的含量。包封率 =（总药量 - 游离药 物量）/ 总药量 ×100%。计算得包封率为 74.1%。

2.3 林蛙抗菌肽脂质体处方筛选

以包封率为指标， 利用单因素分析分别测定磷脂与胆固醇比例、林 蛙抗菌肽含量、磷酸缓冲液 PBS 的 pH 对包封率的影 响。

3 结论

本实验通过单因素分析法考察了不同因素对林蛙 抗菌肽脂质体包封率的影响以及对脂质体处方的筛 选，得出林蛙抗菌肽脂质体制备的最佳工艺为磷脂胆 固醇比为 4:1，药脂比为 1:4，得到的包封率理论上为 79.20%。12 h 林蛙抗菌肽脂质体在皮肤表面的存留率 为 91.79%，而其他林蛙抗菌肽产品的药效时间基本在 4 h 左右，说明林蛙抗菌肽脂质体缓释效果较为明显， 能有效的延长林蛙抗菌肽的药效时间。本实验对林蛙 抗菌肽脂质体的研究对林蛙抗菌肽新剂型的开发具有 一定的实践意义。



 

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