分析红树莓叶抗氧化活性-KQ500DE使用

红树莓（Rubus ideaus L.）属蔷薇科悬钩子属，俗 称覆盆子、托盘等。红树莓在世界温带范围内被广泛 种植，我国东北地区是红树莓的主产区，资源丰富， 种植历史久，规模大，品种多。在过去的20 a中，树莓 和其他小浆果的产量不断增长，市场也在不断扩大。 然而红树莓叶的利用程度没有红树莓果实高，仅有少数 制成茶叶或用于医药用途，并未得到充分的利用。近 年来植物丰富的多酚类物质已成为目前研究的热点。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

欧洲红、澳洲红、红宝石、秋福、哈瑞泰兹、杜拉 明6 种红树莓叶片均采自黑龙江省农业科学院园艺分院试验田，2018年8月19日采茎尖第5～10片叶，密封冷藏避 光运回东北林业大学食品科学实验室冻藏。 标准品：芦丁、槲皮苷、金丝桃苷、绿原酸、鞣 花酸、异鼠李素、表儿茶素、儿茶素、丁香酸、没食 子酸、阿魏酸、咖啡酸、木犀草素（均为色谱纯，纯 度≥98%） 上海源叶生物科技有限公司；其他试剂均 为国产分析纯。

1.2 仪器与设备

722S分光光度计 上海光谱仪器有限公司； FA2004电子天平 常熟市意欧仪器仪表有限公司； DHG-9030A电热恒温鼓风干燥箱 巩义市予华仪器有限责任公司；PHS-3E型pH计 上海仪电科学仪器股份 有限公司；昆山舒美KQ-500DE超声波清洗机 昆山市超声仪器有限公司； 6470液相色谱-质谱联用仪（配有电喷雾离子源，Mass Hunter数据处理系统） 美国安捷伦公司。

1.3 方法

1.3.1 红树莓叶中活性成分含量测定

1.3.1.1 红树莓叶片水分含量

参照GB 5009.3—2016《食品中水分的测定》测定 6 种树莓叶片中的水分活度，根据红树莓叶水分活度折 算成每克红树莓叶干质量的活性物质含量及抗氧化活 性能力。

1.3.1.2 样品提取

红树莓叶解冻后研磨成匀浆，精确称取5.00 g匀浆 液加入50 mL含0.1%乙酸的甲醇溶液超声提取1 h。将提 取物于4 ℃黑暗环境中放置24 h，过滤并收集上清液（以 上程序重复3 次）。在40 ℃条件下减压旋转蒸发馏分 物质，合并馏分，用60%甲醇溶液定容至100 mL容量瓶 中。用于酚类化合物分析和抗氧化评价。

1.3.1.3 福林-酚法测定总酚含量

参考Pantelidis等的方法测定。以没食子酸为标 准品，没食子酸质量浓度（mg/mL）为横坐标，765 nm波长处吸光度为纵坐标。其线性回归方程为y=8.850 3x＋ 0.011 1（R2 =0.999 1）。总酚含量根据红树莓叶含水量折 算成每克红树莓叶干质量含总酚的质量（mg/g）。

1.3.1.4 硝酸铝比色法测定总黄酮含量

参考张海悦等的方法测定。以芦丁为标准品， 芦丁质量浓度（mg/mL）为横坐标，510 nm波长处吸 光度为纵坐标。其线性回归方程为y=1.022 9x＋0.000 3 （R2 =0.999 2）。总黄酮含量根据红树莓叶含水量折算成 每克红树莓叶干质量含总黄酮的质量（mg/g）。

1.3.1.5 香草醛-硫酸法测定原花青素含量

参考孙芸等的方法测定。以儿茶素为标准品， 儿茶素质量浓度（mg/mL）为横坐标，500 nm波长处吸 光度为纵坐标。其线性回归方程为y=1.695 7x－0.001 0 （R2 =0.999 4）。原花青素含量根据红树莓叶含水量折算 成每克红树莓叶干质量含原花青素的质量（mg/g）。

1.3.2 红树莓叶的抗氧化能力测定

1.3.2.1 铁离子还原能力（ferric reducing antioxidant power，FRAP）测定

参考Benzie等的方法测定。以VC作阳性对照。红 树莓叶片提取物采用恒质量法确定样品质量浓度进行适 当稀释。通过比较不同红树莓叶片提取物中加入FRAP工 作液后的吸光度大小，分析其FRAP强弱。

2 结果与分析

红树莓叶提取物的FRAP与样品质量 浓度呈良好的质效关系。在质量浓度为50～70 mg/mL 时，秋福、红宝石、澳洲红的FRAP均高于VC对照组。 其余3 种略低于VC组。当质量浓度为100 mg/mL时，除 杜拉明外，其他品种红树莓叶提取物FRAP高于VC对照 组。以不同浓度FeSO4（mmol/L）溶液为横坐标，734 nm 波长处吸光度为纵坐标，得到曲线方程为y=0.560 3x＋ 0.157 9（R2 =0.999 8），所有品种红树莓叶提取物的FRAP均高于VC， 6 种红树莓叶提取物的FRAP大小依次为秋福＞红宝石＞ 澳洲红＞欧洲红＞哈瑞泰兹＞杜拉明。红树莓叶提取物的总酚与ABTS阳离子 自由基清除能力（r=0.886，P＜0.05）和DPPH自由基 清除能力（r=0.891，P＜0.05）有显著的正相关关系； ABTS阳离子自由基清除能力与DPPH自由基清除能力的 相关性极显著，相关系数为0.992；即总酚对抗氧化活 性的贡献最高，在检验红树莓叶抗氧化活性时可以选用 ABTS阳离子自由基清除能力与DPPH自由基清除能力 中的一种与其他检测方法共同评价红树莓叶片的抗氧化 能力；这与Floegel等的结论相似。本研究中总黄酮和 原花青素与DPPH自由基清除能力和ABTS阳离子自由基 清除能力均为正相关但不显著，但总黄酮与总酚的相关 性较高（r=0.801），因为黄酮从属于多酚，所以在抗 氧化活性贡献上黄酮可以归入酚类物质行列，按照这种 方法计算出总黄酮对DPPH自由基清除能力和ABTS阳离 子自由基清除能力相关性为0.710和0.713，与Pearson分析 结果相近（0.607、0.631）；说明在总酚的抗氧化活性贡 献上总黄酮起到了较高程度的贡献作用，与刘世馨等的实验结果一致。

3 结 论

本实验比较了6 种不同品种红树莓叶中总酚、总黄 酮、原花青素的含量及其与抗氧化活性的相关性；采用 UPLC-MS/MS法对树莓叶中多酚类物质进行定性定量检 测，该方法灵敏，高效。检出的13 种多酚以芦丁和鞣 花酸为主，含有少量的儿茶素、表儿茶素、金丝桃苷、 绿原酸、没食子酸，微量的槲皮苷、木犀草素、异鼠李 素、阿魏酸、咖啡酸、丁香酸。相较于VC，6 种红树莓 叶提取物抗氧化活性良好。红树莓叶中的其他酚类（酚 酸类）物质尚需进一步鉴定。



 

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