金银花总黄酮自微乳处方的优化-KQ5200E使用

金银花为忍冬科植物忍冬 Lonicera japonica Thunb． 的干燥花蕾或带初开的花，为临床常用中 药，具有疏散风热、清热解毒的功效，其总黄 酮有抗氧化、抗炎、抗心律失常、抑菌、保肝等作用，但其水溶性差，相关口服制剂 ( 金银花糖 浆、复方金银花颗粒等) 生物利用度低，从而限 制药效发挥，影响临床应用。将金银花总黄酮制成自微乳可能会提高其水溶性， 但目前尚无相关研究。

1 材料

1. 1 仪器

ZEN3600 型激光粒度仪 ( 英国 Malvern 公司) ; UV762 型紫外可见分光光度计 ( 上海佑科 仪器仪表有限公司) ; KQ5200E 型超声波清洗器( 昆山舒美超声仪器有限公司) ; FA1004B 型电子精 密天平 ( 上海越平科学仪器有限公司) ; TGL-16C 型离心机 ( 上海安亭科学仪器厂) ; ＲE-2000A 型 旋转蒸发器、DF-101S 型集热式恒温加热磁力搅拌 器 ( 巩义市予华仪器有限责任公司) 。

1. 2 试药

芦丁对照品 ( 含有量≥99%，批号 100080，上海源叶生物科技有限公司) ; 金银花总 黄酮 ( 批号 180326，自制，以芦丁计算含有量为 74. 6%) 。金银花购于西安市万寿路药材市场，经 西安医学院药学院边军昌高级实验师鉴定为忍冬科 植物 忍 冬 Lonicera japonica Thunb． 的 干 燥 花 蕾。 D101 大孔吸附树脂 ( 陕西蓝深科技有限公司) ; 聚氧乙烯氢化蓖麻油 ( ＲH-40) 、聚氧乙烯蓖麻油 ( EL-35) ( 德国巴斯夫公司) ; 曲拉通 ( X-100，成 都市科龙化工试剂厂) ; 吐温-80 ( 天津富宇精细化 工有限公司) ; 辛酸癸酸三甘油酯 ( 上海千为油脂 科技有限公司) ; 肉豆蔻酸异丙酯 ( 国药集团化学 试剂有限公司) ; 油酸乙酯 ( 天津市光复精细化工 研究所) ; 聚乙二醇 400 ( 天津市科密欧化学试剂 有限公司) ; 1，2-丙二醇 ( 天津市北联精细化学品 开发有限公司) ; 异丙醇 ( 天津市河东区红岩试剂 厂) 。其他试剂均为分析纯; 水为超纯水。

2 方法与结果

精密称取芦丁对照品 20. 0 mg，置于 50 mL 量瓶中，70%乙醇溶解定容， 得 0. 400 mg /mL 对照品溶液，精密移取 0. 0、1. 0、 1. 5、2. 0、2. 5、3. 0、3. 5、4. 0 mL，置于 10 mL 量瓶中，依次加入 5%亚硝酸钠 0. 4 mL，摇匀，静 置 6 min; 10%硝酸铝 0. 4 mL，摇匀，静置 6 min; 4%氢氧化钠 4 mL，加水定容至刻度，摇匀，静置 15 min，以相应试剂为空白对照，在 510 nm 波长 处测定吸光度。以溶液质量浓度为横坐标 ( X) ， 吸光度为纵坐标 ( A) 进行回归，得 方 程 为 A =4. 366 1X + 0. 011 3 ( r = 0. 997 1 ) ，在 0. 04 ～ 0. 16 mg /mL范围内线性关系良好。称取药材粗粉适量，置于索氏提 取器中，石油醚连续回流至提取液无色后取出晾 干，加入 10、8、6 倍量 70%乙醇回流提取 3 次， 每次 1. 5 h，提取液合并，减压浓缩至无醇味，6 倍量蒸馏水搅拌溶解，12 h 后离心，上清液减压 浓缩至适当浓度，备用。将预处理好的 D101 大孔吸附 树脂 倒 入 烧 杯 中，加入总黄酮浓缩液静态吸附 12 h，将达到吸附饱和的树脂装入层析柱中，依次 用 6 BV 蒸馏水、5 BV 30%乙醇洗脱除去杂质，再 用 5 BV 70%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙 醇，即得总黄酮。精密称取干燥至恒重的总黄酮 50 mg，置于 25 mL 量瓶中，70%乙醇溶解定，精 密移取 2. 0 mL 置于 25 mL 量瓶中，按 “2. 1”项 下方法测定吸光度，测得总黄酮含有量为 74. 6%。

3 讨论

采用 D101 大孔吸附树脂分离纯化金银花总黄酮时，依次用适量纯化水和 30%乙醇除杂， 再用 70%乙醇洗脱，发现纯度较高，粒径较预实 验没有除杂所得的自微乳减小，载药量显著增大， 说明理化性质差别较大的杂质会对其形成产生特殊 影响。因此，在对中药有效部位自微乳处方进行研 究时，应尽可能采用多种纯化方法提高其纯度。