昆山舒美分析定调经滋阴合剂中两种指标性成分

调经活血合剂系笔者所在单位妇科临床验方 基础上经改进制成的院内制剂，目前仍处于研发阶 段。该制剂由黄芪、墨旱莲、续断、肉苁蓉、枸杞子、 菟丝子等多味药材经煎煮制备，具有调经活血，滋 阴补气，安神调和的功效，主治月经不调、阴阳两虚 和更年期综合征等病症。该制剂药味较多，所含 化学成分多种多样，单纯对原料药材进行检测，难 以准确表征全方制剂的质量信息。为全面把握调 经活血合剂的质量，建立多指标含量测定方法成为 较准确和可靠的途径。

1 仪器和材料

1.1 仪器

Waters 2695 高效液相色谱仪，配备 PDA 检测器（美国 Waters 公司）；昆山 KQ3200 超声清洗 仪（昆山舒美超声仪器厂），力晨 HH-2 恒温数显水 浴锅（中国常州诺基仪器有限公司），MettLer-ToLedo精密分析天平（瑞士MettLer-ToLedo公司）。

1.2 试剂、试药和材料

HPLC分析所用乙腈、冰醋酸 为色谱纯，购自Merck（德国）；供试品制备所用乙酸乙酯、甲醇为分析纯，购自广州化学试剂厂（中国）； 毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品（批号130709-201308） 和木犀草素（批号102201-201011）购自中国食品药 品检定研究院（中国）；色谱分析和调经活血合剂制 备所用纯净水为 Watsons 纯净水（中国），所用药材 购自本地药材市场。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

精密吸取调经滋阴合剂 30mL，置 125mL 分液漏斗中，精密吸取乙酸乙酯 20mL，加入分液漏斗中萃取，共萃取两次，分取乙酸 乙酯层，合并，挥干，残渣加甲醇 20mL 复溶，以 0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2 对照品溶液的制备

取毛蕊异黄酮葡萄糖苷和 木犀草素对照品，精密称定，置10mL量瓶中，加甲 醇溶解并定容至刻度，即得两种对照品含量均为 500μg/mL的对照品溶液。

2.3 色谱条件

使用 Thermo HypersiL C18 色谱柱 （4.6×250mm,5μm），乙腈为流动相 A，2%冰醋酸为流动相 B，梯度洗脱，程序为：0-15min，5-15% A； 15-40min，15-25%A；40-45min，25-70%A；45-55min， 70-90%A；55-60min，90-5%A。流速 1.0mL/min，柱 温25℃，进样量10μL，检测波长300nm，供试品和对 照品色谱图见图1.

2.4 方法学验证

2.4.1 标准曲线和线性

精密吸取“2.2”项下制备的 对照品溶液适量，置10mL量瓶中，分别加甲醇稀释 并定容至刻度，即得毛蕊异黄酮葡萄糖苷和木犀草 素对照品含量均为 200、100、50、20、10、5μg/mL 的 溶液。吸取上述溶液，按“2.3”项下方法进HPLC分 析，测定峰面积，以对照品浓度为横坐标x，毛蕊异 黄酮葡萄糖苷和木犀草素峰面积为纵坐标y，代入 ExceL进行线性回归。结果显示，毛蕊异黄酮葡萄 糖苷回归方程为 y=26072x-60322（r 2 =0.9997）；木犀 草素回归方程为 y=18067x-21706（r 2 =0.9996）；表明 方法线性关系良好，能够在200-5μg/mL浓度范围内 对两种指标性成分进行准确定量。

2.4.2 精密度考察

取“2.1”项下制备的供试品溶液， 照“2.3”项下方法进HPLC分析，记录峰毛蕊异黄酮 葡萄糖苷和木犀草素面积，计算 RSD。结果显示， 毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积的RSD为2.71%，木犀 草素峰面积的RSD为1.54%，表明方法精密度良好。

2.4.3 提取回收率考察

精密吸取调经滋阴合剂 25mL，置50mL量瓶中，按表1-1、1-2所述最终含量 加入对照品溶液适量，再加蒸馏水定容至刻度，取 所得溶液 30mL，照“2.1”项下方法处理，再按照“2.3”项下方法进 HPLC 分析，测定峰面积，计算毛 蕊异黄酮葡萄糖苷和木犀草素的含量，回收率和 RSD。结果显示，毛蕊异黄酮葡萄糖苷的平均回收 率为99.0%，RSD为1.98%；木犀草素的平均回收率 为100.39%，RSD为2.24%；表明方法准确度良好。

3 讨论

供试品制备方法中，笔者曾对提取方式、提取 溶剂进行了考察，情况如下：分别考察了超声和萃 取两种提取方式，前者将溶剂挥干后，残渣加甲醇 25mL超声。结果显示，所得色谱图中，超声制备的 供试品溶液干扰峰较多，且毛蕊异黄酮葡萄糖苷和 木犀草素峰响应较低，可能与超声提取不充分有 关。提取溶剂选择方面，笔者分别考察了水饱和正丁醇和乙酸乙酯。结果显示，水饱和正丁醇对毛蕊 异黄酮葡萄糖苷的提取效率较高，对木犀草素提取 效率较低。查阅2015年版《中国药典》，水饱和正丁 醇为黄芪的提取溶剂，但考虑综合提取效率，仍选 择采用乙酸乙酯。