KQ-500E在测定金银花标准汤剂的使用

金银花为忍冬科植物忍冬 Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花，具有清热解毒、 凉散风热等功效，用于瘸肿疗疮、喉痹、丹毒、 热毒血病、风热感冒、温病发热。主产于河南、 山东、河北等地，其主要成分有以绿原酸为代 表的有机酸类、环烯醚萜苷类、黄酮类、三萜皂 苷类等。

1 仪器与试药

Agilent 1260 Infinity Ⅱ高效液相色谱仪(二极 管阵列检测器/紫外检测器，美国 Agilent 公司)； Shimadzu LC-20AD 高效液相色谱仪(紫外检测 器)、AUW 220D 十万分之一电子分析天平均来自 日本岛津公司；ME204 万分之一电子分析天平(瑞 士梅特勒公司)；JJ5000A 电子天平(常熟市双杰测 试仪器厂)；HH-6 数显恒温水浴锅(常州智博瑞仪 器制造有限公司)；KQ-500E 超声清洗仪(昆山舒美超声仪器有限公司)；HGJR-01 红外加热仪(河南中良 科学仪器有限公司)；LGJ-12 低温冷冻干燥仪(北 京松源华兴科技)；SB-1100 旋转蒸发仪、东京理 化 A-1000S 真空泵均来自东京理化器械株式会社。 乙腈(色谱纯，赛默飞世尔科技)，其余试剂均 为分析纯，水为纯净水；绿原酸 ( 批号： 110753-201415；纯度：96.2%)、木犀草苷(批号： 111720-201609；纯度：94.9%)对照品购自中国食 品药品检定研究院；新绿原酸 ( 批号： wkq16050805；纯度 98%)、隐绿原酸(批号： wkq16081903；纯度 98%)、异绿原酸 B(批号： wkq16040902；纯度 98%)、异绿原酸 A(批号： wkq16070203；纯度 98%)、异绿原酸 C(批号： wkq16081905；纯度 98%)对照品均购自四川维克 奇生物科技有限公司。 道地产区的金银花药材，来自河南封丘 3 批， 山东平邑 3 批，河北巨鹿 3 批，河南禹州 3 批， 河南密县 3 批。15 批金银花药材经河南大学药学 院张保国教授鉴定，均为忍冬科植物忍冬 Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花，产地来 源见表 1。按照 2015 年版中国药典金银花项下检 测项目检测均符合要求。


2 方法与结果

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(250 mm× 4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈(A)-0.1%乙酸水溶 液(B)；梯度洗脱：0~40 min，5%→29%A，40~ 41 min，29%→80%A，41~48 min，80%A；检测 波长：327 nm；流速：1.0 mL·min1 ；柱温：35 ℃； 进样量：10 μL。典型色谱图见图 1。分别精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、 木犀草苷、异绿原酸 B、异绿原酸 A 和异绿原酸 C 对照品适量，各置于 10 mL 量瓶中，用甲醇溶解 并定容至刻度，摇匀，作为对照品储备液；分别 精密量取对照品储备液适量，置于同一 10 mL 量 瓶中，加甲醇定容至刻度，得质量浓度分别为新 绿原酸 47.8 μg·mL1 、绿原酸 531 μg·mL1 、隐绿 原酸 94 μg·mL1 、木犀草苷 13.5 μg·mL1 、异绿原酸 B 90 μg·mL1 、异绿原酸 A 212 μg·mL1 、异绿 原酸 C 213 μg·mL1 的混合对照品溶液。金银花是花类、清热解毒 类药材，其标准汤剂的提取方法如下，药材取 100 g，煎煮 2 次，第 1 次加入饮片量 12 倍水，浸 泡 30 min，煮沸后煎煮 20 min，第 2 次加入饮片 量 10 倍水，煮沸后再煎煮 20 min；固液分离，趁 热用 200 目滤布过滤，滤液迅速降温；2 次煎液合 并减压浓缩，浓缩温度<50 ℃，浓缩至 80 mL 左 右，用低温冷冻干燥机干燥成粉末。

3 讨论

考察了甲 醇-水、乙腈-水、乙腈-0.01%乙酸水、乙腈-0.05% 乙酸水、乙腈-0.1%乙酸水几种流动相系统，结果 以乙腈-0.1%乙酸水系统的分离效果较好，在该条 件下，各色谱峰分离度良好，保留时间适中。样 品检测时采用 DAD检测器对供试品溶液进行紫外 190~400 nm 扫描，发现在 327 nm 下色谱峰数较多 且各峰之间分离度较好，所以选择 327 nm 作为吸 收波长。阴性试验中，未见各色谱峰干扰现象。 色谱柱考察了 Agilent Eclipse XDB-C18、日本 BeKMAN C18、Phenomenex Luna C18，选择 Agilent Eclipse XDB-C18 色谱柱，各峰分离度、峰型较好。 金银花样品均为水提，超声就能保证有效成分的 溶出完全，所以供试品制备方法选择超声提取， 所用溶剂分别考察了 30%，50%，70%，100%甲 醇，30%，50%，70%，95%乙醇，结果用 50%乙 醇作为提取溶剂时，各峰分离良好，且绿原酸提 取率最高。



 

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