昆山舒美分析黄酮对照提取物

中药具有多成分、多靶点作用特点，多成分质量 控制模式已成为中药质量控制的主要趋势和重要研 究方向。中药常用的多成分质量控制模式基本采用以 多种单一对照品作为对照物质进行中药质量评价，而 多种单一对照品的模式由于存在化学对照品分离难 度大、生产成本及技术要求高、检测成本昂贵等问题， 在实际应用中受到诸多限制。为解决上述问题，有 研究者提出运用一测多评法开展中药质量控制，但该 方法在相对校正因子的定量、指标成分的色谱峰定 性，以及方法的适用性和耐用性等方面尚存在一些问 题。因此，建立一种适合多成分中药质量控制的 方法是解决中药质量控制问题的有效途径之一，而运 用中药对照提取物对中药进行质量控制，可以在解决 对照品稀缺、多成分同时定量困难等问题方面有较大改善。

SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有 限公司；KQ-500DE 型数控超声波清洗器,昆山舒美超声仪器有限公司；Waters 高效液相色谱仪（包括 1525 型二元高压梯度泵系统、2998 型 DAD 检测器、2414 型柱温控制系统、2707 型自动进样系统、Breeze 色谱 工 作 站 ）， 美 国 Waters 公司；稳定性试验箱 （SHH-GSD），重庆永生实验仪器厂；Sunfire C18 色 谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；Sartorious BT 25S 型十万分之一电子分析天平，北京赛多利斯仪器有限 公司。芸香柚皮苷对照品（批号 MUST-17030408，纯度 99.20%）、柚皮苷对照品（批号 MUST-17040102，纯 度 98.28%）、新橙皮苷对照品（批号 MUST-17040707， 纯度 98.79%），成都曼斯特生物科技有限公司；橙皮 苷对照品（批号 721-860110，纯度 98.08%），中国食 品药品检定研究院。甲醇（色谱纯，Fisher 公司），屈 臣氏纯净水，其他试剂均为分析纯。21 批枳实药材分 别购自不同地区，经北京中医药大学刘元艳教授鉴定 为芸香科植物酸橙 Citrus aurantium L.及其栽培变种 或甜橙 Cirtus sinensis Osbeck 的干燥幼果，来源信息 见表 1。

取枳实药材（S21），适当破碎（绿豆大），用 8 倍量 70%乙醇（含 0.5%氨水）回流提取 2 次，每次 1.5 h，合并 2 次提取液，减压浓缩至无醇味，冷冻干 燥，即得提取物浸膏。提取物浸膏加 10 倍量水超声 （功率 100 W，频率 40 kHz）分散 30 min，3000 r/min 离心 30 min。残渣部分冷冻干燥；上清液以 0.5 BV/h 吸附流速通过 AB-8 大孔吸附树脂柱，以 1 BV/h 洗脱 流速，依次用水洗脱 5 BV、40%乙醇洗脱 4 BV，收 集 40%乙醇洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，即得 40% 乙醇洗脱部位。残渣与 40%乙醇洗脱部位合并，即得 枳实黄酮对照提取物。采用 Sunfire C18 色谱柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm），流动相为甲醇-水-乙酸（38∶58∶4），流速 1 mL/min，检测波长 283 nm，柱温 35 ℃，进样量 10 μL。

本试验中，昆山舒美取同一批次枳实药材，按上述方法分别制备 3 批枳实黄酮对照提取物。所得枳实 黄酮对照提取物中芸香柚皮苷的含量为 1.65%～ 1.71%，柚皮苷的含量为 31.17%～31.54%，橙皮苷的 含量为 2.35%～2.44%，新橙皮苷的含量为 33.63%～ 33.89%，表明枳实黄酮对照提取物中的化学成分比例 相对固定。在枳实黄酮对照提取物制备工艺研究中发现， 70%乙醇提取物浸膏加水分散后存在水不溶物。 HPLC 含量测定结果显示水不溶物中柚皮苷、新橙皮 苷含量较高。因此，本试验考察了加入不同倍量的水 对提取物浸膏分散的影响，结果表明，当加入 10 倍 量水时，水不溶物中柚皮苷、新橙皮苷的含量最高。 针对 70%乙醇提取物浸膏的水溶部分，本试验选择 AB-8 大孔树脂对其黄酮类成分进行富集。依次用不 同浓度乙醇进行洗脱，结果表明 40%乙醇洗脱效果较 好，将水不溶部分与 40%乙醇部位合并即得枳实黄酮 对照提取物。



 

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