KQ2200E在止血调经颗粒指纹图谱研究的使用

止血调经颗粒（Zhixue Tiaojing Granule，ZTG） 是湖南安邦制药有限公司具有知识产权的独家品种，处方由黄芪、阿胶、党参、白芍、当归、仙鹤 草、茜草、佛手和续断 9 味中药组成，处方来源于阿胶养血膏加减，具有益气养血、止血调经功能， 用于上环所致经期延长气血两虚证者，症见经血过 期不净、月经色淡、神疲乏力、头晕眼花、少腹坠 胀、色淡、苔薄白、脉细弱。

赛默飞 UltimateTM U3000 系列高效液相色谱 仪，色谱软件为 Chromeleon Chromatography Data System7.2；AE100 型电子分析天平，十万分之一， Mettler Toledo 公司；KQ-2200E 型超声波清洗仪， 昆山市超声仪器有限公司。

乙腈、甲醇，色谱纯，Sigma-Aldrich 公司；PLSW Series 超纯水，青海蓝天有限公司；对照品芍药苷 （批号 110736-201842）、毛蕊异黄酮葡萄糖苷（批 号 111920-201606 ）、芒柄花素（批号 111703- 201504），中国食品药品检定研究院。黄芪、党参、 白芍、当归、仙鹤草、茜草、佛手和续断 8 味药材 均由湖南安邦制药有限公司提供，所有药材经湖南 安邦制药有限公司分析质量中心杨勇研究员鉴定为 豆科黄芪属植物蒙古黄芪 Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsiao 的干燥 根、桔梗科党参属植物党参 Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf. 的干燥根、毛茛科芍药属植物芍药 Paeonia lactiflora Pall. 的干燥根、伞形科当归属植 物当归 Angelica sinensis (Oliv.) Diels 的干燥根、蔷薇科龙牙草属植物龙芽草 Agrimonia pilosa Ledeb. 的干燥地上部分、茜草科茜草属植物茜草 Rubia cordifolia L. 的干燥根和根茎、芸香科柑桔属植物 佛手 Citrus medica L. var. sarcodactylis Swingle 的干 燥果实和川续断科川续断属植物川续断 Dipsacus asper Wall. ex Henry 的干燥根。 10 批次 ZTG 样品由湖南安邦制药有限公司研 制生产，具体批号为 20180301（S1）、20180302（S2）、 20180303（S3）、20180601（S4）、20180602（S5）、 20180603（S6）、20180604（S7）、20181001（S8）、 20181002（S9）、20181003（S10）。

色谱柱为 Thermo AcclaimTM 120 C18 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为纯水-乙腈；梯度 洗脱：0～5 min，5%乙腈；5～40 min，5%～35% 乙腈；40～60 min，35%～95%乙腈；检测波长 254 nm；柱温 30 ℃；体积流量 1 mL/min；进样量 10 μL； 理论塔板数以芍药苷计不低于 50 000。

精密称取芍药苷、毛蕊 异黄酮葡萄糖苷和芒柄花素对照品适量，用甲醇溶 解并定容，配成含芍药苷质量浓度为 1.90 mg/mL、 毛蕊异黄酮葡萄糖苷质量浓度为 1.55 mg/mL 和芒 柄花素质量浓度为 0.59 mg/mL 的对照品溶液。

取 ZTG 适量，取约 2.5 g，精密称定，至 25 mL 锥形瓶中，精密加入甲醇 20 mL，称量，超声提取 30 min 后，放冷，用甲醇 补足减失的质量，摇匀静止，取上清液过 0.22 μm 微孔滤膜，取滤液，即得。

精密吸取同一 ZTG（S1）供试 品溶液 10 μL，按“2.1”项下色谱条件连续进样测 定 6 次，记录其色谱图。以 4 号峰（芍药苷）为参照，计算 11 个共有峰的相对保留时间和相对峰面 积，结果表明，各特征峰的相对保留时间和相对峰 面积的 RSD 分别为 0.02%～0.10%和 0.38%～ 7.85%，其中，芍药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面 积 RSD 分别为 3.18%和 1.28%，表明仪器精密度良 好，符合指纹图谱的要求。

取 ZTG（S1）6 份，精密称定， 按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供 试品溶液 10 μL，分别进样测定，记录色谱图。以 4号峰（芍药苷）为参照峰，计算 11 个共有峰的相对 保留时间和相对峰面积，结果表明，各特征峰的相 对保留时间和相对峰面积的 RSD 分别为 0.01%～ 0.14%和 1.16%～9.81%。而芍药苷和毛蕊异黄酮葡 萄糖苷峰面积 RSD 分别为 3.41%和 1.96%，结果表明，该方法重复性好。

考察了以水及 30%、50%、80%、100% 甲醇作为提取溶剂，实验发现，样品在含有水为溶 剂的提取液中，提取的溶剂为棕褐色的，而甲醇提 取液为棕黄色，各提取溶剂提取后的溶液均有不溶 物，含有水为溶剂的提取液无法通过 0.45 μm 的针 式过滤膜，必须经过 10 000 r/min、10 min 的离心之 后才能够滤过，给样品前处理造成困难，且图谱由 于含有杂质较多，基线偏移度较大，因此综合考虑， 选用甲醇作为提取溶剂。采用了DAD全波长扫描的方式，通过3D图谱， 可以看出样品的峰面积均不太明显，提取出 220、 240、254、270、300 nm 等波长下的图谱进行比较， 发现在 220 nm 等较低的波长段，基线不平稳，漂 移度大，在 270 nm 较高波长段的中间洗脱段的峰 形较差，综合考虑，选取 254 nm 综合性较好的波 长为检测波长。在流动相选择过程中，考虑到中药复方制剂成 分复杂，乙腈的洗脱能力较甲醇强，且使用乙腈做 流动相，色谱柱压力更低，有利于延长色谱柱的使 用寿命，最后选定乙腈做有机相洗脱。



 

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