KQ500DB在斑马鱼的毒性效应分析中的使用

五氟磺草胺是由美国陶氏益农公司于2004年开发 上市的三唑并嘧啶磺酰胺类除草剂，是水稻田常用除草 剂，其作用广谱，对多种阔叶杂草和水生杂草高效， 作用方式为苗后除草。由于农药施用后，会随着灌溉等农事操作进入环境，对环境具有一定程度的潜在危害， 并对环境中的非靶标生物(如水环境中的鱼类、藻类；土 壤中的蚯蚓、微生物等)具有一定的毒性效应。

GXZ型智能光照培养箱 (宁波江南仪器厂)；KQ500DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)； FA2004A电子天平(上海精天电子仪器有限公司)；Thermo 移液枪；Nexcope数码生物显微镜NE930；Waters ACQUITY UPLC-H-Class Xevo-TQS Micor超高效液相色谱-串联质 谱，配有电喷雾离子源(ESI)(美国Waters公司)。 96%五氟磺草胺(武汉远成共创科技有限公司)；超纯水。

将斑马鱼3月龄幼鱼移入装有2 L药液的大烧杯中， 每处理10尾鱼，不设重复。处理后24、48、72、96 h，对五氟 磺草胺药液质量浓度进行取样检测有效成分含量，观察 记录各药液质量浓度下幼鱼的死亡情况和中毒症状。

将供试胚胎用吸管移入装有2 mL药液的24孔板中， 每孔1枚胚胎，每质量浓度处理20枚胚胎。处理后6、24、 48、72、96 h，用生物显微镜观察各药液质量浓度下胚胎 的发育情况，并拍照记录。

参照GB/T 31270.12—2014，采用静态法进行试验， 观察并记录幼鱼中毒症状及死亡率。

液相条件：色谱柱，ACQUITY UPLCTM BEH C18(50 mm× 2.1 mm 1.7 μm)；流速：0.35 mL/min；柱温：35 ℃；进样体 积：2 μL；总运行时间4.5 min。流动相A为0.1%甲酸水(v/v)， B为乙腈；洗脱梯度：0~2 min，90%~2% A；2~3 min，2% A； 3~3.01 min，2%~90% A；3.01~4.5 min，90% A。 质谱条件：毛细管电压为3.0 kV；脱溶剂温度为550 ℃； 离子源温度为150 ℃；脱溶剂气流速为1000 L/h；锥孔反 吹气为30 L/h；离子扫描模式为ESI+ ；离子监测模式为多 反应离子监测。

经液质联用仪检测，五氟磺草胺各质量浓度药液实 测含量均大于理论浓度的80%。由表1可知：五氟磺草胺 对斑马鱼3月龄幼鱼96 h的LC50值为4.38 mg/L，95%置信 限为4.07～4.70 mg/L，毒性等级为中毒。

2.2 对斑马鱼胚胎毒性效应

2.2.1 对斑马鱼胚胎毒性及死亡率的影响

五氟磺草胺对斑马鱼胚胎96 h的 LC50值为34.37 mg/L，95%置信限为16.32～72.38 mg/L，对 斑马鱼胚胎造成危害的最低质量浓度为5 mg/L，处理组 24 h白卵率与药液存在质量浓度相关性。

以五氟磺草胺水溶液处理胚胎后，处理组胚胎孵化 时间较对照均有延迟，48 h时对照孵化了50%，2.5 mg/L 质量浓度下孵化了10%，其他质量浓度组均未孵化。

72 h时50 mg/L以上质量浓度处理的 胚胎，发生少量畸形，少量无法孵化出卵壳，心跳数较对 照降低；对照组胚胎正常发育，72 h的初孵幼鱼正常，分 化结构清晰可见，生命活动正常；处理组部分白卵，且处 理组72 h部分胚胎未孵化，未孵化的幼鱼体心包囊肿，有 一定畸形，自主运动较对照缓慢。

本研究采用斑马鱼作为模式生物，分别就五氟磺草 胺对3月龄幼鱼、胚胎和初孵幼鱼毒性效应进行了测定 和观察。试验结果表明：五氟磺草胺对斑马鱼3月龄幼鱼毒性等级为中毒，对斑马鱼胚胎和初孵幼鱼均为低毒， IUPAC网站数据表明：该药剂对虹鳟鱼96 h的LC50值大于 100 mg/L，为低毒，可能由于供试用鱼品种和大小不一 致，造成的结果会有一定的差异；五氟磺草胺对斑马鱼 胚胎造成危害的最低质量浓度为5 mg/L，处理胚胎白卵 率增多，孵化时间有延迟，72 h处理胚胎自主运动慢，且 高质量浓度处理组出现少量畸形，少量无法孵出卵壳， 心跳也比对照缓慢。



 

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