KQ5200B对大鼠体内组织中的分布行为的应用

氟噻草胺属芳氧乙酰胺类除草剂，主要用于玉米、大豆、向日葵等作物 上，适用于多数一年生禾本科杂草以及一些阔叶 杂草的防除，其作用机制为阻止杂草细胞的分 裂，抑制其生长。氟噻草胺具有选择性高、毒性 低、作用范围广以及合成简单等优点。目前， 对氟噻草胺的研究多集中于其药效上，而对其 在环境中的残留检测相对较少，未见其在大鼠 体内组织中分布行为的报道，而相关研究对于农 药研发、毒性作用机制研究、毒物的安全性评价 以及中毒解救都有重要意义。鉴于此，本研究拟 建立大鼠组织中氟噻草胺的 LC-MS/MS 分析方 法，并采用该方法对氟噻草胺灌胃给药后在大 鼠体内各组织中的分布行为进行研究，旨在为其 毒性安全性评价提供科学依据。

LC-20A 高效液相色谱系统 (日本 Shimadzu 公司)；API 3200 质谱联用仪，配备 Analyst 1.5.1 操 作软件和 LightSight 2.3 软件 (美国 AB Sciex 公 司)；Sartorius BSA3233S 电子天平 [ 赛多利斯科学 仪器 (北京) 有限公司 ]；Milli-Q 超纯水机 (美国 Millipore 公司)；KQ5200B 型超声清洗器 (昆山市超声仪器有限公司)；Sigma 3K15 高速离心机 (美 国 Sigma 公司)；QT-1 涡旋振荡器 (上海琪特分析 仪器有限公司)；T18 basic 新型高速分散机 (德国 IKA 公司)。 氟噻草胺 (flufenacet，纯度 > 98%) 和啶氧菌 酯 (picoxystrobin，内标，纯度 > 98%) 标准品 (沈 阳化工研究院有限公司)。乙腈 (色谱纯，美国 Fisher Scientific 公司)；甲酸 (色谱纯，上海阿拉丁 公司)；CO2 /O2 (麻醉用)；超纯水 (自制)。

雄性 SD 大鼠由辽宁长生生物技术有限公司提 供，许可证号：SCXK (辽) 2015-0001。动物室温 度 19~26 ℃，空气相对湿度 40%~70%，光照条件 为 150~300 lx (光照/黑暗各 12 h)，噪音在 60 dB 以下。动物的使用经沈阳化工研究院有限公司安 全评价中心伦理委员会审批通过。动物饲料为全 价颗粒饲料，置于塑料动物盒内饲养，自由进 食、饮水。大鼠经适应性饲养 5 d 后单只饲养于不 锈钢笼内，染毒前禁食 18 h，均采用灌胃方式染 毒，染毒量为每千克体重 10 mL。

色谱条件：Phenomenex 反向 C1 8 色谱柱 (50 mm × 4.6 mm，5 μm)；流速 0.6 mL/min；柱温 为室温；进样量 10 μL；流动相为体积分数 72% 的乙腈-水溶液 (含体积分数 0.1% 甲酸)；等度洗脱。 质谱条件：电喷雾离子源 (ESI)；离子源温度 450 ℃；喷雾电压 5 000 V；碰撞气压力 20.704 kPa； 去簇电压 28.00 V；入口电压 5.20 V；碰撞入口电 压 20.73 V；碰撞出口电压 11.00 V；雾化气 1 压 力 344.827 kPa；雾化气 2 压力 384.615 kPa，气帘 气压力 172.413 kPa；多反应监测模式 (MRM)； 氟噻草胺与内标 (啶氧菌酯) 定量离子对分别为 364.10/194.20 和 368.10/145.20，碰撞能量分别为 14.00 和 26.00 eV。

通过预试验可知，400 mg/kg 剂量的氟噻草胺未导致 SD 大鼠死亡，给药后 1 h 血浆中出现原药，为吸收相，7 h 血浆中原药浓度 达到高峰，为分布相，48 h 血浆中原药浓度达到 最大浓度的 5%，为消除相。据此试验设 2 个处理 组：空白溶剂对照组和 400 mg/kg 染毒组。随机 取雄性大鼠 16 只，包括空白溶剂对照组 1 只， 400 mg/kg 染毒组 15 只，给药前禁食 18 h。经口 灌胃法一次性给药方式，给药量为每千克体重 10 mL，给药后将动物放回饲养笼内，自由进食、 饮水。分别于处理后 1、7 和 48 h 取染毒组大鼠 5 只， 48 h 取对照组大鼠，采用 V (CO2 )∶V (O2 ) = 80∶20 麻醉，腹主动脉放血后解剖，取心、肝、 脾、肺、肾、脑、肌肉、睾丸、脂肪、胃、大肠 和小肠，分别用生理盐水和蒸馏水冲洗后，装入 惰性塑料袋中，于–20 ℃ 保存，待测。

将样品解冻并剪碎、混匀，分 别称取染毒组各组织 0.5 g，加入 1 mL 体积分数 70% 的乙腈水溶液，匀浆，于 15 000 r/min、4 ℃ 下离心 10 min；取上清液 100 μL，依次加入 20 μL 内标 (心脏、肝脏、脾、肺、肾脏、脑、肌肉、睾丸和 脂肪添加 0.050 mg/L 的啶氧菌酯， 大肠、小肠和 胃添加 25.0 mg/L 的啶氧菌酯)，20 μL 乙腈，涡旋混 匀；再加入 200 μL 乙腈，涡旋混匀后于 15 000 r/min、 4 ℃ 下离心 10 min；取上清液适量，用体积分数 70% 的乙腈水溶液稀释 2 倍，待 LC-MS/MS 测定。

取空白组织，加入 2 倍体 积量的 70% 乙腈水溶液，匀浆，于 15 000 r/min、4 ℃ 下离心 10 min，取上清液作为空白对照组织 上清液。

分别考察了乙腈-水、甲醇-水以及乙腈-乙酸 铵作为流动相对氟噻草胺响应值的影响。结果发 现：以乙腈-水作为流动相时，氟噻草胺的响应值 较高，在水相中添加体积分数 0.1% 的甲酸后，增 加了在 ESI+ 模式下的离子化效率。同时还考察了 有机相和水相不同配比对待测物及内标响应值的 影响。结果发现：以体积分数 72% 乙腈水溶液 (含 0.1% 甲酸) 作为流动相时，氟噻草胺与内标的 响应值较高，出峰时间合适，内源性物质对样品 测定无影响。在 m/z 50~500 范围内对氟噻草胺及内标啶氧 菌酯的标准溶液进行全扫描，获得其总离子流图 (TIC)。根据所得 TIC，确定各化合物的母离子 m/z 值，分别以母离子进行产物离子扫描，确定定性 和定量离子对；通过多反应监测模式扫描优化碰 撞能量、去簇电压及碰撞出口电压等参数。氟噻 草胺与啶氧菌酯的二级全扫描质谱图。心脏、肝脏、脾脏、肺、 肾脏、脑、肌肉、睾丸和脂肪在 0.005、0.02 和 0.08 mg/L 3 个添加水平下，小肠、大肠和胃在 0.25、1.0 和 8.0 mg/L 3 个添加水平下，氟噻草胺 在大鼠各组织匀浆液中的回收率在 87%~118% 之 间，相对标准偏差在 1.3%~11% 之间，满足生物 样品测定要求。氟噻草胺在 0.005~0.08 mg/L添加水平下，大鼠肝组织中的提取回收率在 96%~ 106% 之间，满足生物样品测定要求，基质不影 响待测物的测定。

组织分布研究是农药毒物代谢动力学研究中的重要组成部分，通过了解农药的组织分布特点 有助于确定毒物发挥毒性的靶点，进而对于揭示 农药的毒性作用机制、毒物的安全性评价以及中 毒解救都具有重要意义。目前，关于氟噻草胺的 代谢研究较少，未见其在大鼠体内组织分布的相 关报道。