KQ-300DB使用于小鼠抗焦虑作用研究

酸枣仁是中医常用的养心安神药，从古代医书 记载和临床用药来看对酸枣仁的用法有生用和炒熟 用的习惯，但历代医家对生、炒酸枣仁功效主治说 法各有不同。著名老中医施今墨先生将生酸枣 仁与炒酸枣仁作为药对，二者配伍使用，其认为“熟 枣仁补肝宁心安神，生枣仁清肝宁心安神。二药参 合，一补一清，清补合法，宁心安神的力量增强”。 三 重 复 合 实 验 装 置（Triple-test）是 2008 年 Andre Ramos 等提出的一种用于评价啮齿类实验动物 焦虑情绪和探索行为的复合实验装置，其整合了目 前公认的三种评价状态焦虑动物模型的经典方法 （OFT+EPM+LDB），可以区分测量不同抗焦虑药物 对不同种属小鼠焦虑情绪和探索行为的影响，其最 显著的特点是避免了传统方法因测量而带来的实验 耐受性，同时利用动物模型的异质性，既可以从不同 角度综合评价状态焦虑动物模型，又平均化了这种 因异质性而带来的误差。

清洁级 ICR 小鼠，雄性，体质量 18~20 g，购于辽 宁长生生物技术有限公司。许可证号：SCXK（辽） 2015-0001。

生与炒酸枣仁合煎液：以 1∶1 比例称取生与 炒酸枣仁粗粉各 250 g，加入 8 倍量的蒸馏水，浸泡 30 min，然后用电磁炉加热，130 ℃加热至沸腾后再 100 ℃下煎煮 80 min。16 层纱布过滤药液，滤液用 旋转蒸发仪浓缩至含生药量 1 g/mL，放冰箱备用。 阳性对照药：地西泮，2.5 mg/ 片，山东省平原制 药厂，批号 100904。取两片地西泮加蒸馏水超声溶 解，定容到 100 mL 容量瓶中，即得 0.05 mg/mL 的混 悬液。

Mouse CORT ELISA Kit：R ＆ D Systems，Inc， Lot：E20161201A。

Triple-test 实验装置，见图 1。实验装置由三个经典的焦虑模型测试装置 连接组成：分别是旷场试验（OF）、高架十字迷宫 （EPM）和明暗穿梭箱（LDB）。动物行为视频分析系统：北京天鸣宏远科技发 展有限公司，V3.20 版；分析天平：美国梅特勒 - 托 力多仪器上海有限公司，型号：MS204S；超声波清洗仪：型号：KQ-300DB，昆山市超声仪器有限公司； 恒温水浴锅：金坛华龙实验仪器厂，型号：HH-S8； 多 功 能 酶 标 仪：美 国 伯 腾 仪 器 有 限 公 司，型 号： SynergyMx；高速低温冷冻离心机：美国 TOMOS 有限 公司，型号：3-18R（3006004）

1.2 实验环境控制条件

1.2.1 饲养环境

饲养环境为通风、避光、隔音、屏蔽状态，采用 自动定时光控系统对小鼠的生活环境实行明暗光照 周期处理（12/12 h 明暗交替，早上 7：00 熄灯，晚上 19：00 开始照明，即昼夜颠倒）。室温：（24±1）℃。 小鼠每 4 只一笼（30 cm×19 cm×13 cm），并在笼内 放置一 PVC 管（内径直径 4 cm，长 7.5 cm）构成丰富 环境，所有动物自由获得食物和水。

同上。实验期间，所有光照均来自 Triple-test 实 验装置的光源，使明区的光照强度为 640~1300 lux， 暗区的光照强度为 7~13 lux，高架迷宫的光照强度 为 2~4 lux，旷场的光照强度为 14~20 lux，Triple-test 实验时间为 9：00-17：00。

实验结果表明，与空白组比较，阳性组和生与 炒酸枣仁配伍组小鼠的旷场中央区运动时间百分 比、中央区运动距离和周边区运动距离都没有显著 性变化（P>0.05）。实验结果显示，与空白组比较，阳性组和生与 炒酸枣仁配伍组小鼠进入高架十字迷宫开臂次数百 分比和在高架十字迷宫开臂停留时间百分比都有显 著增加（P<0.01），阳性组小鼠进入高架十字迷宫闭 臂次数显著增加（P<0.01），生与炒酸枣仁配伍组无 显著变化（P>0.05）。实验结果显示，与空白组比较，阳性组和生与 炒酸枣仁配伍组小鼠在明暗穿梭箱明区运动时间百 分比显著性增加（P<0.05）、在明暗穿梭箱穿梭次数 有极显著性增加（P<0.01）。阳性组小鼠在明箱中运 动距离有显著性增加（P<0.05），生与炒酸枣仁配伍 组小鼠有极显著性增加（P<0.01）。阳性组和生与炒 酸枣仁配伍组小鼠在暗箱中运动距离与空白组比较 无显著性变化（P>0.05）。

旷场实验（OFT）、高架十字迷宫（EPM）和明 暗穿梭箱（LDB）是三种公认的用于评价和建立状 态焦虑动物模型的经典方法，三种方法单独使用 不能全面的反映实验动物的焦虑状态，但如果对 同一实验动物连续应用三种方法会因测量的重复 性而带来实验耐受性。本研究采用 Andre Ramos于 2008 年提出的复合实验装置，其整合了目前 公认的三种建立状态焦虑动物模型的经典方法 （OFT+EPM+LDB），其原理是利用啮齿动物天性厌 恶明亮开阔的地区，但他们同时还有探索新鲜事 物（包括威胁和刺激）的特性，这种探索本性和外 界环境的矛盾冲突就造成了啮齿类动物在实验中 的焦虑情绪。