昆山清洗器对于指纹图谱建立的帮助

高脂血症为临床上的多发病及常见病，是引发 脂肪肝、心脑血管疾病的重要病因之一，中医 药在防治该疾病上具有独特优势，可多靶点、多环 节综合降脂，而且毒副作用小，相关中药或保健食 品市场前景良好。

六味葛蓝降脂片是由广西中医药大学制药厂拟 开发的具有辅助降血脂功效的保健食品，由绞股 蓝、火麻仁、决明子、葛根、沙棘、荷叶 6 味药食 两用药材配伍而成，通过扶正祛邪、补中益气来调 节机体代谢机能，从而达到降血脂作用。方中 葛根和决明子发挥主要作用，前者所含异黄酮是重 要药效物质，葛根素、大豆苷、大豆苷元等具有扩张冠状动脉血管、增加冠状动脉血流量作 用，同时可降血脂; 后者具有降血脂、降血 压等疗效，可抑制血清胆固醇，以降血脂效果更显 著，其主要有效成分为蒽醌，代表性成分 有橙黄决明素、大黄酚，为泻下、降血脂作用的主 要成分。

本次分析建立六味葛蓝降脂片 HPLC 指纹图谱， 并测定其中葛根素、大豆苷、大豆苷元、橙黄决明 素、大黄酚的含有量，为完善该制剂质量标准提供 依据。

Agilent 1260 高效液相色谱仪，配置 UV 型紫 外检测器; TGL-16G 离心机 ( 上海安亭科学仪器 厂) ; KQ5200B 超声清洗器 ( 昆山市超声仪器有限 公司) ; SQP 电子天平 ［百万分之一，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司］; 超纯水 ( 密思博超纯水机制备) 。六味葛蓝降脂片共 10 批 ( 批 号 20170501、20170601、20170602、20170603、20170701、 20170801、 20170802、 20170803、 20170901、 20171001) ，2 g /片，由广西中医药大学制药厂提 供，原药材均购自广西玉林市祥生中药饮片有限责 任公司，经广西中医药大学制药厂质量保证部专家 鉴定为正品。葛根素对照品 ( 170109，含 有 量 ＞ 98%，上海融 禾 医 药 科 技 有 限 公 司) ; 大 豆 苷 ( MUST-17092780，含 有 量 99. 46%) 、大 豆 苷 元 ( MUST-17101202，含有量 99. 99%) 、橙黄决明素 ( 111900-201303， 含 有 量 99. 1%) 、 大 黄 酚( MUST-17041310，含 有 量 99. 50%) 对 照 品 ( 成 都曼思特生物科技有限公司) 。乙腈为色谱纯 ( 美 国 Fisher 公司) ; 甲醇、磷酸为分析纯 ( 国药集团 化学试剂有限公司) ; 水为超纯水。

Phenomenex Gemini C18 色 谱 柱 ( 250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ; 流动相乙腈 ( A) - 0. 1%磷酸 ( B) ，梯度洗脱( 0 ～ 8 min，15%A; 8 ～ 20 min，30%A; 20 ～ 40 min，55%A; 40 ～ 45 min， 60%A; 45～55 min，70%A; 55 ～ 60 min，85%A) ; 体积流 量 1. 0 mL /min; 检 测 波 长 280 nm; 柱 温 30 ℃ ; 进样量 10 μL。

精密称取葛根素、大豆苷、 大豆苷元、橙黄决明素、大黄酚对照品适量，甲醇 分别制成 1. 210 0、0. 750 0、0. 635 0、0. 570 0、 0. 315 0 mg /mL，取适量置于同一量瓶中，甲醇稀 释，即得 ( 质 量 浓 度 分 别 为 0. 164 1、0. 067 3、 0. 034 4、0. 054 9、0. 028 9 mg /mL) ，置于冰箱中 贮存备用。

取本品 20 片，研细，精密称 取约 2 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入 20 mL 甲 醇，称定质量，超声 ( 200 W、40 kHz) 30 min， 冷却至室温，甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过， 续滤液离心，取上清液，即得。

取供试品溶液( 批 号 20170501) ，在 “2. 1” 项色谱条件下进样测定 6 次，以 7 号峰的保留时间和色谱峰面积为参照，测 得其 余 11 个共有峰的相对保留时间 ＲSD 在 0. 05% ～0. 24%之间，相对峰面积 ＲSD 在 0. 89% ～ 2. 0%之间，表明仪器精密度良好，符合相关要求 和规定。

取供试品溶液( 批 号 20170501) ，于 0、2、4、8、12、24 h 在 “2. 1” 项色谱条件下进样测定，以 7 号峰保留时间和色谱 峰面积为参照，测得其余 11 个共有峰的相对保留 时间 ＲSD 在 0. 09% ～ 1. 1%之间，相对峰面积 ＲSD 在 0. 64% ～2. 0%之间，表明溶液在 24 h 内稳定性良好，符合相关要求和规定。

取本品 ( 批号 20170501) 约 2 g，按 “2. 2. 2”项下方法制备 6 份供试品溶液， 在 “2. 1”项色谱条件下进样测定，以 7 号峰保留 时间和色谱峰面积为参照，测得其余 11 个共有峰 的相对保留时间 ＲSD 在 0. 10% ～0. 34%之间，相对 峰面积 ＲSD 在 1. 2% ～1. 9%之间，表明该方法重复 性良好，符合相关要求和规定。

取 10 批样品，按 “2. 2. 2”项 下方法制备供试品溶液，在 “2. 1”项色谱条件下 进样测定，见图 1，再通过 “中药指纹图谱相似度 评价软件” ( 2012. 130723 版) 进行分析，平均数 法生成对照图谱，多点校正法建立指纹图谱，见图 2。共标示出 12 个共有峰，由于 7 号峰 ( 大豆苷 元) 保留时间适中，稳定性好，峰面积较大，故 选择其作为参照峰 ( S) ; 10 批样品相似度均大于 0. 997，表明其质量相对稳定，共有成分基本一致， 但含有量上有差异。

3 讨论

本次考察供试品溶液制备方法时，以甲醇、 水、乙醇为提取溶剂，比较了超声、回流提取，以 及提取时间、溶剂用量、提取次数对含有量测定的 影响，发现在取样量 2 g、甲醇 20 mL、超声30 min 条件下供试品溶液中 5 种成分总含有量较高，分离 度较好，而且操作简便。然后，采用二极管阵列检 测器分析不同波长下色谱图，发现在280 nm处各成分较稳定，含有量较高，并与其他杂质峰达到良 好的分离效果。