射干饮片异黄酮苷转化的影响(昆山舒美KQ250DB使用

肠道菌群在糖苷类化合物的代谢过程中起着 重要作用，目前植物中多数多酚类化合物以苷类的 形态存在，口服后经过水解被吸收，这个过程发 生在大肠或者小肠，研究资料表明在结肠的菌群具 有强大的催化和水解潜力，它们能够催化黄酮类化 合物的骨架 C6-C3-C6 断裂为各种酚酸类代谢产 物，大多数糖苷类化合物需经肠道菌群酶解为苷 元等代谢产物而发挥药效。

1 实验仪器与材料

Agilent 1100 LC-DAD 系统（包括在线脱气机、 低压四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列 检测器和色谱工作站）；FA1004 万分之一天平（上 海精密科学仪器有限公司）；JSP-500A 型高速多功 能粉碎机（浙江省永康市金穗机械制造厂）；昆山舒美KQ250DB 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。三气培养箱（德国 BINDER；CB150）。 射 干 苷（批 号 为 111632-200501，购 于 中 国 食 品药品检定研究院）；野鸢尾苷和野鸢尾黄素（批号分别为13030803、13051402，均购于成都普瑞法科 技有限公司）；鸢尾黄素（批号为12081808，购于成都 生物科技有限公司）。射干药材采于湖北GAP基地， 经辽宁中医药大学李峰教授鉴定为射干Belamcanda chinensis（L.）DC.的根及根茎。乙腈为色谱纯；水为 娃哈哈纯净水；乙醇、磷酸等其他试剂均为分析纯。 K2HPO4·3H2O，KH2PO4，NaCl，（NH4）2SO4， MgSO4·7H2O，CaCl2，Na2CO3，L- 半胱氨酸，L- 抗坏 血酸，牛肉膏，蛋白胨，营养琼脂等均购于国药集团 化学试剂集团公司。 大鼠，雄性，体质量 180~220 g，由辽宁长生生 物技术有限公司提供，动物许可证号 SCXK（辽） 2010-0001。

2 方法与结果

2.1 厌氧培养液的制备

溶液 A：称取 K2HPO4·3H2O 1.02 g 加水适量使 溶解并稀释至 100 mL，备用。溶液 B：称取 KH2PO4 0.47 g，NaCl 1.18 g，（NH4）2SO4 1.21 g，MgSO4·7H2O 0.51 g，CaCl2 0.12 g，加水适量使溶解并稀释至 100 mL，备用。溶液 C：称取 Na2CO3 12 g 加水适量使溶 解并稀释至 150 mL，备用。分别取 A 液 37.5 mL、B 液 37.5 mL、C 液 50 mL 混合，加入 L- 半胱氨酸 0.5 g， 25% L- 抗坏血酸 2 mL，牛肉膏 1 g，蛋白胨 1 g，营养 琼脂 1 g，加蒸馏水至 1 L，盐酸调 pH 至 7.5~8.0，即 可。

2.2 大鼠肠道菌培养液的制备

按 1 g∶4 mL 的质量体积比将大鼠新鲜粪便 与生理盐水混合研磨制成悬浊液，低温离心 15 min （5000 r·min-1）后得上清液，即为肠道菌液。取 50 mL 肠道菌液，加入 500 mL 培养液中，混匀，得到 培养液，将厌氧培养液置于三气培养箱中 37 ℃厌氧 条件下（NO2∶CO2∶O2=78∶20∶2）培养 24 h，得到 培养液（1）；另取 200 mL 培养液在 0.08 MPa、115 ℃ 条件下灭菌 20 min，得到空白培养液（2）。

2.3 大鼠肠道菌对射干饮片中射干苷、野鸢尾苷代谢转化作用

取射干饮片 50 g，平行 3 份，每份分别加入 100 mL 大鼠肠道菌培养液（1），混合后在三气培养 箱厌氧条件下（NO2∶CO2∶O2=78∶20∶2）37 ℃培养 24 h，取出，用水洗涤饮片，80 ℃干燥至干，粉碎，备 用。

2.4 HPLC方法的建立

2.4.1 色谱条件

色谱柱为 Column XB-C18（4.6 mm × 250 mm， 5 μm）；流动相为 0.2% 磷酸水溶液（A）和乙腈（B）， 梯度洗脱：0~15 min，A 为 85%~75%；15~25 min，A 为75%~72%；25~35 min，A为72%~65%；35~50 min， A 为 65%~50%。体积流量为 1.0 mL·min-1；DAD 检 测器，检测波长为 265 nm；柱温 30 ℃。

2.4.2 专属性实验

在“2.4.1”色谱条件下，测定空白培养液（A）， 空白培养液 + 混合对照品（B）、射干饮片（C）和射干 饮片孵育 24 h（D）的色谱图，见图 1。结果表明：在 此色谱条件下，样品溶液中射干苷、野鸢尾苷、鸢尾 黄素及野鸢尾黄素色谱峰可完全分离，培养液中其 他组分无干扰，专属性良好。

2.4.3 线性关系考察

精密称取射干苷、野鸢尾苷、鸢尾黄素、野鸢尾 黄素对照品各适量，加 70% 乙醇溶解，分别制成各 对照品储备溶液。再分别精密吸取各对照品储备溶 液适量至量瓶中，用 70% 依次稀释成不同质量浓度 梯度的工作溶液，工作液中各成分的浓度见表 1。

3 讨论

射干主要含射干苷、野鸢尾苷、鸢尾黄素、野鸢 尾黄素、次野鸢尾黄素、白射干素等异黄酮类化合 物，具有抗炎、抑菌、抗病毒等多种药理效应，但由于 射干苷、野鸢尾苷等苷类成分的分子量较大，脂溶性 较差，因此在体内的吸收不好，生物利用度较低，有 德国学者研究报道，大鼠在口服射干苷溶液后，在 其尿液样品中只检出鸢尾黄素而并未发现射干苷。 说明在体内射干苷是通过脱掉糖基转化成相应的苷 元鸢尾黄素而参与体内生物活动。在前期肠吸收研 究中，也发现射干苷及野鸢尾苷在大鼠肠道内会水 解为鸢尾黄素及野鸢尾黄素，并且肠道LPH 酶可 能参与了射干苷及野鸢尾苷在肠道的水解过程。



 

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