分析复方感冒灵颗粒HPLC指纹图谱建立

复方感冒灵颗粒由山银花、五指柑、野菊花、 三叉苦、南板蓝根、岗梅 6 味中药，以及对乙酰氨基酚、咖啡因、马来酸氯苯那敏 3 种西药组成的中 西药复方制剂，用于治疗风热感冒及温病之发热、微恶风寒、头身痛、口干而渴、鼻塞涕浊、咽喉红 肿疼痛、咳嗽、痰黄黏稠，疗效确切，市场需求量 大，现有药品标准 ( 国家食品药品监督管理总局 国家药品标准 WS3-B-2384-97-2017) 定性采用 TLC 法鉴别其中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏，滴定 法测定对乙酰氨基酚含有量，但对中药相关质 量控制与药效物质基础的阐释仍为空白，导致质量 有差异，药效不稳定，成为制约相关产业发展亟待 解决的问题。

1 材料

1. 1 仪器

Agilent 1290 型高效液相色谱系统，配 置 6530Accurate-Mass Q-TOF-LC-MS /MS、Qualitative Analysis B． 05. 00 色谱处理软件 ( 美国安捷伦科技 公司) ; KQ5200DE 型数控超声波清洗器 ( 昆山舒美市超声仪器有限公司) ; XPE105 型 电 子 分 析 天 平 ( 瑞士 Mettler-Toledo 公司) 。

1. 2 试 药

对 乙 酰 氨 基 酚 ( 批 号 100018- 201409) 、咖啡因 ( 批号 171215-201211) 、绿原酸 ( 批号 110753-201716) 、原儿茶酸 ( 批号 110809- 200604) 、咖啡酸 ( 批号 110885-200102) 、蒙花苷 ( 批号 111528-201710) 对照品均购自中国食品药 品 检 定 研 究 院; 异 绿 原 酸 A ( 批 号 MUST18032601) 、异绿原酸 B ( 批号 MUST-18031602) 、新绿原酸 ( 批号 MUST-18031001) 、隐绿原酸 ( 批 号 MUST-18032403) 、异 绿 原 酸 C ( 批 号 MUST18031603) 对照品均购自成都曼思特有限公司。 乙腈、甲醇为色谱纯 ( 美国 Tedia 公司) ; 甲酸为 分析纯 ( 长沙市汇虹化玻仪器设备有限公司) ; 水 为怡宝纯净水。复方感冒灵颗粒由华润三九 ( 郴 州) 制药有限公司提供，共 10 批，批号分别为 1709026N、1709027N、1709028N、1806254N、1806255N、 1806256N、 1806257、 1806258N、 1806259N、 1806260N， 编号 S1～ S10。

2 方法与结果

精密称取各对照品适量， 50%甲醇定容，即得，每 1 mL 分别含对乙酰氨基 酚 2. 6 mg、原儿茶酸 10 μg、新绿原酸 80 μg、绿 原酸 100 μg、咖啡因 0. 18 mg、隐绿原酸 80 μg、 咖啡 酸 5 μg、异 绿 原 酸 B 40 μg、异 绿 原 酸 A 20 μg、异绿原酸 C 45 μg、蒙花苷 100 μg。精密称取颗粒粉末 9. 0 g， 置于具塞锥形瓶中，精密加入 50 mL 50% 甲醇， 称定 质 量，超 声 ( 功 率 250 W、频 率 50 kHz) 30 min，冷却，50%甲醇溶液补足减失的质量，摇 匀，滤过，取续滤液，即得。Kromasil C18 色谱柱 ( 250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ; 流 动 相 乙 腈 ( A) -0. 1% 甲 酸 ( B) ，梯度洗脱 ( 0 ～ 20 min，5% →18% A; 20 ～ 45 min，18%→26%A; 45 ～ 55 min，26%→35%A; 55～ 60 min，35% →5% A; 60 ～ 65 min，5% A) ; 检测 波 长 290 nm; 柱 温 30 ℃ ; 体 积 流 量 1. 0 mL /min; 进样量 10 μL。色谱图见图 1。

电喷雾电离源离子化 ( ESI) ，负 离子模式采集; 辅助喷雾电离、脱溶剂气体高纯 N2 ; 干燥气体积流量 6. 8 L /min; 鞘气温度 350 ℃ ; 毛细管电压 4. 0 kV; 碎片电压 130 V; m /z 50 ～ 1 000。取供试品 ( S1) 溶液，于 0、 3、6、9、12、15、24 h 在 “2. 3” 项色谱条件下 进样测定，测得各共有峰相对保留时间、相对峰面 积 ＲSD 均小于 3%，表 明 溶 液 在 24 h 内 稳 定 性 良好。

3 讨论

考察了超 声提取、回流提取，发现两者对测定结果无明显影 响，故选择操作简便的前者，再比较了提取溶剂 ( 甲醇、乙醇、50% 甲醇、50% 乙醇) 、溶剂用量 ( 25、 50、 100 mL ) 、 提 取 时 间 ( 20、 30、 40 min) ，综合考虑色谱峰数、分离度、对称因子、 相对内参比峰面积和，最终确定供试品溶液制备方法为 50 mL 50%甲醇超声提取 30 min。本实验利用二极管阵列检测 器全波长扫描，重点考察了 245、256、260、273、 290、325、330、334 nm 波长下的指纹图谱，综合 考虑色谱峰数、分离度、相对内参比峰面积和，发 现 290 nm 处效果较好，故选择其作为检测波长。 由于复方感冒灵颗粒中野菊花、 山银花等药材所含成分呈略偏酸性，故流动相也应略偏酸。文献  报道，山银花、野菊花中 主要成分的 HPLC 分离溶剂一般采用乙腈，而液质 采用甲酸，故水相为 0. 1%甲酸。再选择 5 种流动 相比例来优化梯度洗脱条件，发现以 “2. 3”项下 流动相洗脱时基线较平稳，色谱峰分离良好，而且 数量多，高度适中。



 

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