昆山舒美分享香豆素类成分渗漉提取工艺的优化

白芷为伞形科植物白芷 Angelica dahurica ( Fisch． ex Hoffm．) Benth． et Hook． f． 或 杭 白 芷 Angelica dahurica ( Fisch． ex Hoffm．) Benth． et Hook． f． var． formosana ( Boiss) Shan et Yuan 的干燥根，主要用于治疗感冒头痛、眉棱骨 痛、鼻塞、鼻渊、牙痛、白带异常、疮疡肿痛，其主要 成分为香豆素、挥发油，其中有效镇痛物质是前者，并且 有一些具有抗氧化、抗增殖活性，如欧前胡素、异欧前 胡素等。本实验建立 HPLC 法测定欧前胡素含有量，并 在单因素试验基础上通过正交试验优化白芷中香豆素类成 分渗漉提取工艺，以期为相关研究提供理论依据。

1 材料

1. 1 仪器

EC2000 高效液相色谱仪 ( 配置 UV230+ 紫外可见检测器、手动进样器，大连依利特分析仪器有限公 司) ; ＲE-52AA 旋转蒸发仪 ( 上海亚荣生化仪器厂) ; SHB- Ⅲ循环水式多用真空泵 ( 郑州长城科工贸有限公司) ; DLSB-5120 低温冷却液循环泵 ( 上海贤德实验仪器有限公 司) ; KQ-300TDE 高频数控超声波清洗器 ( 昆山舒美超声仪器有限公司) ; HX-200 高速中药粉碎机 ( 浙江省永康市溪 岸五金药具厂) ; AＲ124CN 电子天 平 ［奥 豪 斯 仪 器 ( 上 海) 有限公司］。

1. 2 试药

白芷 ( 批号 G07816F01) 购自四川中庸药业有限公司，经专家鉴定为正 品。欧前胡素对照品 ( 批 号 T9MZ-FFSK，上海源叶生物科技有限公司) 。甲醇为色谱 纯; 乙醇为分析纯; 水为娃哈哈纯净水。

2 方法与结果

2. 1 粉碎度考察

取药材适量，粉碎，称取粉碎度 10、 20、30、40 目的各 20 g，40 mL 80%乙醇湿润浸泡，装筒，加入 8 倍量 80%乙醇，渗漉速度 3 mL/ ( min·kg) ，浸泡 时间 12 h，渗漉液置于 50 ℃水浴中浓缩定容至 50 mL 量瓶 中，再吸取 2. 0 mL 定容至 10 mL 量瓶中，摇匀，0. 45 μm 微孔滤膜过滤。结果发现，粉碎度 20 目时欧前胡素含有量 最高，故选择其进行后续实验。

2. 2 对照品溶液制备

精密称取欧前胡素对 照 品 10. 00 mg，置于 50 mL 量瓶中，甲醇溶解定容至刻度，摇 匀，精密吸取 3. 0、4. 0、5. 0、6. 0、7. 0 mL 于 10 mL 量瓶 中，甲醇稀释至刻度，摇匀，0. 45 μm 微孔滤膜过滤，即 得 ( 每 1 mL 分别含 0. 06、0. 08、0. 10、0. 12、0. 14 mg 欧 前胡素) 。

2. 3 供试品溶液制备

将药材粉碎成粗粉，过 20 目筛， 称取 20 g，40 mL 乙醇湿润浸泡，装筒，续加乙醇，静置， 渗漉，渗漉液置于 50 ℃ 水浴中，浓缩定容至 50 mL 量瓶 中，再吸取 2. 0 mL 定容至 10 mL 量瓶中，摇匀，0. 45 μm 微孔滤膜过滤，即得。

2. 4 色谱条件

Kromasil C18 色谱柱 ( 4. 6 mm × 150 mm， 5 μm) ; 流动相甲醇 ∶ 水 ( 65 ∶ 35) ; 检测波长 300 nm; 柱 温室温; 体积流量 1. 0 mL/min; 进样量 20 μL。色谱图见 图 1，理论塔板数不低于 3 000。

2. 5 线性关系考察

吸取 “2. 2”项下对照品溶液，以溶 液质量浓度为横坐标 ( X) ，峰面积为纵坐标 ( Y) 进行回 归，得方程为 Y = 21 596. 95X + 438. 653 ( Ｒ2 = 0. 999 67) ， 在 0. 06～ 0. 14 mg /mL 范围内线性关系良好。

2. 6 含有量测定

公式为含有量 = 12. 5× ( Y－438. 653) 21 596. 95 ， 其中 Y 为欧前胡素峰面积。

3 讨论

白芷中香豆素类成分欧前胡素和异欧前胡素受热不稳 定，前者易发生 Claisen 烯丙基重排，生成别欧前胡素，即 使在真空中加热也会如此。前期曾采用水蒸气蒸馏法提 取白芷，但得率低，耗时长，浪费能源，同时易破坏其他有效成分，故本实验采用乙醇渗漉法提取，能较好地保 留有效成分。 由于粉碎度过细时，提取率反而会下降，故白芷在 提取过程中不宜粉碎过细，避免提取过程中发生堵塞渗漉 筒现象，影响提取效果。同时，采用粗粉进行提取，即方 便操作，也符合渗漉法提取特点和要求。 在含有量测定时，曾采用精密量取提取液，低温蒸干 后甲醇溶解残渣的方法来制备供试品溶液，但在甲醇溶解、 转移过程中会造成有效成分的损失。因此，采用提取液稀 释后进行测定，该方法操作简便，结果可靠。



 

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