罗布麻叶中 6 个黄酮类成分的分析

一测多评（quantitative analysis of multi-components by single marker，QAMS）是一种适合中药特点的多指 标质量评价的新模式，它利用样品中化学成分的比例 关系，在只测定 1 个成分（内参物，通常为典型成分 且化学对照品可得到者）的情况下，实现对多个成分 （对照品难以得到或难供应）含量的测定。该方法克 服了对照品短缺这一问题，即只测定某个代表性成 分，同时可计算出其他待测有效成分的含量 。一 测多评法是经严格的方法学考察，建立内参物与其 他成分间的相对校正因子，并用其计算其他成分的 含量。近年来，一测多评法已得到广泛的认可和验 证，并成功应用于多种药材的多成分含量测定研究 中 ，黄连药材的一测多评法被《中华人民共和国 药典》（以下简称《中国药典》）采用。

Agilent 1260 液相系统：配有 G1311C 四元梯度 泵，G1329B 自 动 进 样 器，G1316A 柱 温 箱，G4212B DAD 检测器（Agilent Technologies 公司）；Mettler XP205 电子天平（梅特勒公司）；KQ-800KDE 型超声仪 （昆山市超声仪器有限公司）；Milli-Q 超纯水处理系 统（Millipore 公司）。

乙 腈（色 谱 纯，Fisher 公 司，批 号 165747）；磷 酸（色谱纯，Fisher 公司，批号 154772）；甲醇（分析 纯，国药集团化学试剂有限公司，批号 20161025）；实 验用水为超纯水。对照品金丝桃苷（批号 111521- 201708，纯度 95.1%）、槲皮素（批号 100081-200907， 纯 度 96.5%）、山 柰 酚（批 号 110861-200808，纯 度 95.9%）购自中国食品药品检定研究院，芦丁（批号 16111111，纯度 98.0%）、紫云英苷（批号 17031820， 纯度 98.8%）购自上海雅吉生物科技有限公司，异槲 皮苷（批号 CFS201701，纯度 98.8%）购自武汉天植 生物技术有限公司。 20 批罗布麻叶药材购自全国 11 个省、市、自治 区的药店或药材市场，经北京医院药学部徐硕主管 药师鉴定为夹竹桃科罗布麻属植物罗布麻 Apocynum venetum L. 的干燥叶。

色 谱 柱：Waters XBridge C18 色 谱 柱（250 mm× 4.6 mm，5 µm）；流动相：乙腈（A）-0.2% 磷酸溶液 （B），梯 度 洗 脱（0~8 min，5%A → 12%A；8~20 min， 12%A → 18%A；20~35 min，18%A → 25%A；35~40 min，25%A → 35%A；40~50 min，35%A → 50%A）； 流速：0.8 mL·min-1；检测波长：256 nm；柱温：35 ℃； 进样量：10 µL。

分别精密称取芦丁、金丝桃 苷、异槲皮苷、紫云英苷、槲皮素、山柰酚的对照品适 量，用 80% 甲醇水溶液溶解，配制成质量浓度分别为20.8、568、460、204、40.6、13.6 μg·mL-1 的混合对照 品储备液。精密量取混合对照品储备液 1、2.5、4、5、 6、12.5、25 mL，分别置于 50 mL 量瓶中，加 80% 甲醇 水溶液稀释至刻度，摇匀，获得 7 个系列浓度混合对 照品溶液（芦丁：0.416，1.04，1.664，2.08，2.496，5.2， 10.4 μg·mL-1；金 丝 桃 苷：11.36，28.4，45.44，56.8， 68.16，142，284 μg·mL-1；异 槲 皮 苷：9.2，23，36.8， 46，55.2，115，230 μg·mL-1；紫 云 英 苷：4.08，10.2， 16.32，20.4，24.48，51，102 μg·mL-1；槲皮素：0.812， 2.03，3.248，4.06，4.872，10.15，20.3 μg·mL-1；山柰酚： 0.272，0.68，1.088，1.36，1.632，3.4，6.8 μg·mL-1）。

取罗布麻药材粉末（过 60 目 筛）约 0.5 g，精密称定，置于 25 mL 量瓶中，加入 80% 甲醇水溶液 15 mL，振荡 2 min，超声提取（功率 800 W，频率 40 kHz）60 min，冷却至室温后，加 80% 甲醇 水溶液稀释至刻度，摇匀，经 0.22 µm 微孔滤膜滤过， 取续滤液即得。

在“2.1”项的色谱条件下， 6 个待测成分的理论塔板数均大于 90 000，样品中 6 个待测成分色谱峰峰形良好，与相邻峰的分离度大于 1.5。混合对照品及罗布麻叶样品色谱图见图 1。

3　讨论

3.1 检测波长的选择

根据各成分在流动相中的紫外吸收谱图来确定 检测波长。芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素均在 256 nm 处有最大吸收，紫云英苷、山柰酚在 266 nm 处有最大吸收，在 256 nm 处也均有较强吸收，兼顾 6 个成分在样品色谱图中的响应值，最终选择 256 nm 作为检测波长。

金丝桃苷是《中国药典》2015 年版规定的罗布 麻叶质量控制的指标性成分，而且其在供试品溶液中 含量较高，性质稳定，较易获得，故选择为内参物，建 立与其他待测成分间的相对校正因子。

本研究考察了采用甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%磷 酸、乙腈 -0.2% 磷酸、乙腈 -0.5% 磷酸溶液作为流动相 对 6 个待测成分含量测定结果的影响，结果显示用乙 腈 -0.2% 和 0.5% 磷酸时的效果较好且基本一致，故 选择乙腈 -0.2% 磷酸溶液为流动相。通过反复摸索， 考察不同梯度洗脱程序，在最终确定的色谱条件下， 6 个待测成分峰形良好，理论塔板数均大于 90 000，待 测成分间以及与样品中其他成分之间的分离度良好。