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槟榔含有多种人体所需的营养物质和微量元素， 如脂肪、槟榔油、生物碱等成分，其性味苦、辛、 温，具有杀虫、消积等功能，可药用也可食用。在 我国，槟榔拥有巨大的市场，仅湖南地区产值就已 达到 40 亿 ~ 50 亿元。消费者对槟榔的口感、口味 有一定要求，甜度是影响槟榔口感的重要指标之一。 甜蜜素 （C6H11NH）2 化学名称为环己基氨基磺酸钠， 是一种人工合成的非营养型低热能甜味剂，其甜度 为蔗糖的 30~50 倍，且价格低廉、后苦味小，因此 被广泛用于食品加工、农业等领域。但有研究表 明甜蜜素不被人体吸收而且会加重人体肝脏负担，对肾脏有毒副作用，并具有潜在致癌性，因此在 实际过程中要严格把控甜蜜素的添加量。国家制定 相关的甜蜜素检测标准 （GB/T 5009.97—2003），该 标准中甜蜜素的检测方法包含填充柱气相色谱法、 比色法、薄层层析法。气相色谱法测定甜蜜素时 通常以环己醇亚硝酸脂作为定量依据，但甜蜜素 和亚硝酸钠在硫酸存在时会生成环己醇，环己醇可 与亚硝酸钠发生酯化反应生成环己醇亚硝酸酯，此 反应为可逆反应，环己醇不能完全转换为环己醇亚 硝酸酯，而 2 种产物之间的峰面积之和一定，因此 可以通过 2 种产物的峰面积之和进行定量分析。
通过峰面积加和的定量方法并结合超声提取， 建立了从槟榔中检测甜蜜素的方法，并通过正交试 验筛选出最佳提取工艺，该方法准确度高，精密度、 分离度良好，可以满足槟榔中的甜蜜素检测。
甜蜜素 （标准品纯度≥98%），上海源叶生物科技有限公司提供；正己烷、氯化钠、亚硝酸钠溶液、 硫酸溶液。以上试剂均为分析纯。
Agilent GC7890B 型气相色谱，配FID检测器， 美国安捷伦公司产品；SHZ- 82 型恒温水浴振荡器， 常州市中贝仪器有限公司产品；AR224CN 型分析天 平，奥豪斯仪器有限公司产品；ZWSH- 250 型超纯 水机，湖南中沃水务环保科技有限公司产品；KQ700E 型超声波清洗机，昆山舒美超声仪器有限公司 产品。
色谱柱：HP- 5 石英毛细管柱 （30 m×0.32 mm× 0.25 μm）；进样口：加热器温度 220 ℃，进样量 1 μL，分流比 5∶1；载气 N2，流量 40 mL/min；柱 箱温度：恒温 70 ℃；FID 检测器：温度 250 ℃，氢 气流量 47 mL/min，空气流量 400 mL/min，氮气流量 30 mL/min。
选取 5 颗大小、形状、纹路近似的槟榔，切碎 混匀，取 2~3 g 样品置于 50 mL 锥形瓶中，以超纯 水为提取溶剂，采用超声的方法提取槟榔中甜蜜素， 样品经超声提取后冷却至室温，取 1 mL 提取液置于 100 mL具塞比色管中，依次加入 15 mL超纯水、5 mL 50 g/L亚硝酸钠溶液和 100 g/L硫酸溶液，冰浴，以转 速 80 r/min 振摇 30 min 后，加入 5 g 氯化钠，10 mL 正己烷，振摇 100 次，静置分层，取上层正己烷适 量注入气相色谱仪中进行测定，每个样品平行 3 份。
称取槟榔碎块 9 份，每份 2.0 g，采用 L（9 34 ）正交 试验表进行试验设计，结合单因素试验结果，以甜蜜 素提取率为指标，考查料液比 （A）、提取温度 （B）、 超声时间 （C） 3 个因素对甜蜜素提取率的影响。 正交提取试验因素与水平设计见表 1。
超声时间对甜蜜素提取率的影响见图 1。
由图 1 可知，随着超声时间的延长，甜蜜素提 取率逐渐升高，但在 60 min 后甜蜜素提取率随着超 声时间的延长而降低，这可能是因为超声波作用时 间过长破坏了甜蜜素分子结构所致。因此选取超声 时间 45，60，75 min 3 个水平进行正交试验。
提取温度对甜蜜素提取率的影响见图 2。
高，甜蜜素提取率越高。提取温度高于 70 ℃后， 甜蜜素提取率下降。造成这种现象的原因可能是在 低温时，随着温度的升高，分子运动加快，使得甜 蜜素从槟榔中充分释放；当温度高于 70 ℃后，超声 波与高温的协同作用使得甜蜜素分子破坏降解，导 致提取所得甜蜜素含量降低。因此选取提取温度 50， 60，70 ℃ 3 个水平进行正交试验。
料液比对甜蜜素提取率的影响见图 3。 由图 3 可知，对比料液比 1∶5 与 1∶10，前者 的甜蜜素提取率远低于后者，料液比在 1∶10 后，甜 蜜素提取率几乎没有变化。可以判断料液比 1∶10 可 溶解槟榔中大部分甜蜜素，所以继续增大料液比对甜蜜素含量几乎没有变化。因此，综合考虑选用料液比 1∶10，1∶15，1∶20 3 个水平进行正交试验。
采用超声提取 / 气相色谱法测定槟榔中甜蜜素的 含量，利用单因素试验和正交试验确定了最佳提取 工艺为提取温度 60 ℃，超声时间 30 min，料液比 1∶15 （mg∶mL）。同时，使用 HP- 5 毛细管柱管对 样品中的甜蜜素进行了分离，用组校准的方法对样 品进行了定量分析。测定槟榔中甜蜜素的方法，检测 结果准确、甜蜜素峰形好、线性范围广、良好的准确 度和精确度，重复性、再现性好，可以满足槟榔中甜 蜜素含量的检测，在槟榔行业中具有推广意义。
