复方小檗碱鞣酸蛋白胶囊分析（昆山舒美KQ-300G

复方 小 檗 碱 鞣 酸 蛋 白 胶 囊（曾 用 名 为 泻 痢 朗 胶囊）是贵州泛 德 制 药 有 限 公 司 独 家 生 产 的 止 泻药，主要用于痢疾、急慢性肠炎等。复方小檗碱 鞣酸蛋白胶囊现行标准为 ＷＳ－１０００１－（ＨＤ－１１１１）－２００２，该标准 含 量 测 定 项 下 采 用 紫 外 分 光 光 度 法 测定盐酸小 檗 碱 含 量，未 对 处 方 中 的 其 他 成 分 进 行含量控制，本品处方中每粒含有盐酸小檗碱１２０ ｍｇ、鞣酸蛋白３００ｍｇ、马来酸氯苯那敏２ｍｇ、硝酸 硫 胺５ｍｇ、乳 酸 依 沙 吖 啶 ３０ ｍｇ 和 硅 酸 铝 ４３ｍｇ。

１ 材料

１．１ 仪器

ＴｈｅｒｍｏＵｌｔｉｍａｔｅ３０００高效液相色谱 仪；岛津 ＬＣ－２０Ａ 高效液相色谱仪；ＷａｔｅｒｓＡｌｌｉ－ ａｎｃｅｅ２６９５高效液相色谱仪；ＭＥＴＴＬＥＲＴＯＬＥＤＯ ＸＳ２０５电子天平；ＡｇｉｌｅｎｔＺＯＲＢＡＸＳＢ－Ｃ１８色谱柱 （４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；ＷａｔｅｒｓＸＢｒｉｄｇｅＣ１８色 谱柱 （４．６ ｍｍ ×２５０ ｍｍ，５ μｍ）；Ｔｈｅｒｍｏ Ａｃ－ ｃｌａｉｍＴＭ Ｃ１８色谱柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；昆山舒美KQ-300GDV型恒温数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

１．２ 试药

盐酸小檗碱对照品（纯度８６．７％，批号 １１０７１３－２０１８１４）、马 来 酸 氯 苯 那 敏 对 照 品 （纯 度 ９９．７％，批号 １００４７－２０１５０７）、硝酸 硫 胺 对 照 品 （纯 度９９．８％，批号１００２９７－２０１４０２）、乳酸依沙吖啶对 照品（纯度９４．３％，批号１００２９０－２０１００２），上述标准 对照品均购自中国食品药品检定研究院。甲醇（色 谱纯，美国 Ｔｅｄｉａ公司），水为超纯水，其余试剂均为 分析纯 （市 售）。复 方 小 檗 碱 鞣 酸 蛋 白 胶 囊 （批 号 １７０７２０１２、 １７１１２０１１、 １７１２２０１１、 １８０５２０１１、 １８０５２０１２、 １８０７２０１１、 １８０９２０１１、 １８０９２０１２、 １８０９２０２１、１９０１２０１１）均由贵 州 泛 德 制 药 有 限 公 司 提供。

２ 方法与结果

２．１ 色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅 烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液［０．０５ｍｏｌ·Ｌ－１ 磷酸二氢钾溶液和０．０５ｍｏｌ·Ｌ－１庚烷磺酸钠溶液 （１∶１），含 ０．２％ 三 乙 胺，并 用 磷 酸 调 节 ｐＨ 值 至 ３．０］－甲醇（４３∶５７）为流动相；检测波长为２６２ｎｍ。 理论板数按小檗碱峰计算不低于３０００，盐酸小檗 碱、马来酸氯苯那敏、硝酸硫胺和乳酸依沙吖啶峰 与相邻峰之间的分离度均应符合要求。

２．２ 测定法

取本品２０粒，精密称定，倾出内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于盐酸小檗碱 １２０ｍｇ），置５０ｍＬ 量瓶中，加提取溶剂［６０％甲醇 溶液（每 １００ ｍＬ 中 含 １ ｍＬ 盐 酸）］约 ４０ ｍＬ，置 ６０ ℃的水浴中振摇溶解，放冷，用提取溶剂稀释至 刻度，摇匀、滤过，取续滤液作为供试品溶液（１），用 于测定马来酸氯苯那敏和硝酸硫胺；精密量取供试 品溶液（１）１ｍＬ置５０ｍＬ量瓶中，用提取溶剂稀释 至刻度，摇匀，即得供试品溶液（２），用于测定盐酸 小檗碱和乳酸依沙吖啶。精密量取供试品溶液（１） 和供试品溶液（２）各１０μＬ，注入液相色谱仪，记录 色谱图；另取盐酸小檗碱、马来酸氯苯那敏、硝酸硫 胺、乳酸依沙吖啶对照品适量，精密称定，用提取溶 剂溶解，定量稀释制成每１ｍＬ中约含盐酸小檗碱 ０．０４８ｍｇ、马 来 酸 氯 苯 那 敏 ０．０４ ｍｇ、硝 酸 硫 胺 ０．１ｍｇ和乳酸依沙吖啶０．０１２ ｍｇ的 混 合 对 照 品 溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

２．３ 溶液配制

２．３．１ 供试品溶液制备

精密称取复方小檗碱鞣 酸胶囊内容物适量（约相当于盐酸小檗碱１２０ｍｇ）， 按“２．２”项下方法制备供试品溶液（１）和供试品溶 液（２）。

２．３．２ 对照品溶液的制备

精密称取硝酸硫胺对 照品０．０２００６ｇ、马来酸氯苯那敏对照品０．０１３１５ ｇ、盐酸小檗碱对照品０．０１１０８ｇ和乳酸依沙吖啶 对照品０．０１３２１ｇ，分别置２０，５０，２０ｍＬ和５０ｍＬ 量瓶中，加提取溶剂溶解并稀释至刻度，即得相应 的对照品溶液。分别精密量取硝酸硫胺对照品溶 液０．５，１．０，１．５，２．０，３．０，４．０ ｍＬ 置 ２０ ｍＬ 量瓶 中；马来酸氯苯那敏对照品溶液０．５，１．０，２．０，３．０， ４．０，６．０ｍＬ 置同一２０ｍＬ 量瓶中；盐酸小檗碱对 照品溶液０．５，１．０，１．５，２．０，３．０，４．０ ｍＬ 置同一 ２０ｍＬ量瓶中；乳酸依沙吖啶对照品溶液０．２，０．５， ０．７，１．０，１．５，２．０ｍＬ 置同一２０ｍＬ 量瓶中，分别 加提取溶剂稀释至刻度，摇匀，即得线性溶液１～６， 其中线性溶液４即为含量测定用混合对照品溶液。 精密称取硝酸硫胺对照品０．０５９６１ｇ和马来 酸氯苯那敏对照品０．０２４９４ｇ分别置５０ｍＬ 量瓶 中，加提取溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得硝酸 硫胺和马来酸氯苯那敏对照品贮备液。

２．３．３ 空白辅料溶液的制备

称取厂家提供的辅 料，按处方制备成相应质量浓度的空白辅料样品， 按“２．２”项下方法制备空白辅料溶液。

２．４ 方法学验证

２．４．１ 系统适用性试验

按“２．３．２”项下方法制 备混合对照品溶液和空白辅料溶液，按“２．１”项下色谱条件进行试验，各色谱峰峰型良好，各色谱峰 之间分离度均大于１．５，理论板数均在３０００以上， 空白辅料溶液无干扰。

２．４．２ 线性关系

分别吸取“２．３．２”项下线性溶 液１～６各１０μＬ注入液相色谱仪中，按“２．１”项下 色谱条件测定峰面积，记录色谱图。 以硝酸硫胺、马来酸氯苯那敏、盐酸小檗碱和 乳酸依沙吖啶对照品的质量浓度（μｇ·ｍＬ－１）为横 坐标，各成分的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线， 得回归方程，见表１。结果表明，各成分在试验的质 量浓度范围内，线性关系良好。

２．４．３ 稳定性试验

按“２．３”项下制备供试品溶 液和混合对照品溶液，室温下分别在０，１，２，４，６，８， １０，１２ｈ各精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液 各１０μＬ注入液相色谱仪中，按“２．１”项下的色谱条 件测定峰面积，记录色谱图。结果供试品溶液和混 合对照品 溶 液 中 硝 酸 硫 胺 ＲＳＤ 分 别 为 ０．９６％ 和 ０．２７％；马 来 酸 氯 苯 那 敏 ＲＳＤ 分 别 为 ０．２４％ 和 ０．３８％；盐 酸 小 檗 碱 ＲＳＤ 分 别 为 １．１８％ 和 １．１０％；乳 酸 依 沙 吖 啶 ＲＳＤ 分 别 为 ０．１９％ 和 ０．６３％。表明供试品溶液和混合对照品溶液１２ｈ 内稳定性良好。

２．４．４ 重复性试验

按“２．３”项下平行制备６份供 试品溶液和２份混合对照品溶液，精密吸取供试品 溶液和混合对照品溶液各１０μＬ 注入液相色谱仪 中，按“２．１”项下的色谱条件测定峰面积，记录色谱 图，按外标法计算含量，结果样品中硝酸硫胺含量 为９．４２３ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ 为０．５９％；马来酸氯苯那敏含量为３．６３３ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ 为０．２７％；盐酸小檗碱 含量为２２２．４ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ 为０．６５％；乳酸依沙吖 啶含量为４９．１０ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ 为１．１６％。表明该 法重复性结果良好。

３ 结果与讨论

３．１ 样品测定结果分析

从１０批样品的含量测定 结果可以看出，现行标准中控制含量的成分盐酸小 檗碱有３批在限度９０％～１１０％之间，其余７批均 高于高限，现行标准采用重铬酸钾比色法测定盐酸 小檗碱含量，通过比较２种方法的测定结果，ＨＰＬＣ 法测定结果比重铬酸钾比色法约高１０个百分点，因 此原方法测定盐酸小檗碱的含量准确性还有待进 一步研究。拟定其他３个成分含量限度均为９０％ ～１１０％，则硝酸硫胺的合格率为５０％、马来酸氯苯 那敏合格率为 ４０％、乳酸依沙吖啶合格率为 ０，１０ 批样品总的合格率为０；从马来酸氯苯那敏与硝酸 硫胺含量均匀度的测定结果可以看出，合格率只有 ３０％。含量均匀度的测定均值与含量基本一致，说 明方法是科学合理可行的。从含量均匀度项目每 片所测结果可以看出，样品的均匀性是有保障的， 造成含量均匀度结果超出限度范围的原因是马来 酸氯苯那敏与硝酸硫胺含量均值过低，如果厂家能 保证该两个成分的含量是在限度范围内，则含量均 匀度的测定结果应该是在《中国药典》规定的限度 范围内。因此，含量及含量均匀度的测定结果提示 生产企业及相关监管部门完善提高本品的质量标 准是迫切且势在必行的。

３．２ 检测波长的选择

实验过程中对所测４个成 分进行了 ＤＡＤ 光谱扫描，结果盐酸小檗碱的最大 吸收波长为２３０．３ｎｍ、２６５．９ｎｍ 和３４８．２ｎｍ；马来 酸氯苯那敏的最大吸收波长为２２４．５ｎｍ 和２６２．０ｎｍ；硝 酸 硫 胺 的 最 大 吸 收 波 长 为 ２３７．４ｎｍ 和 ２６３．３ｎｍ；乳酸依沙吖啶的最大吸收波长为２０６．３， ２７１．６，３６９．５ｎｍ。所测４个成分中，考虑到马来酸 氯苯那敏的含量最低，每粒只有２ｍｇ，在其最大吸 收波长２６２ｎｍ 处，其他３个成分在此波长也有很 好的吸收，且空白辅料无干扰，故选择２６２ｎｍ 作为 含量测定的测定波长。



 

免责声明：文章仅供学习和交流，如涉及作品版权问题需要我方删除，请联系我们，我们会在第一时间进行处理。