蜂胶总黄酮稳定性的影响(昆山舒美KQ-500DB使用)

蜂胶是蜜蜂在采集花粉的过程中，由植物幼 芽分泌物和树脂，融合自身上颚腺分泌的唾液融 合而成的物质。蜂胶在自然界中的产量非常有 限，但表现出来的生理效应却是异常独特而强大， 故蜂胶有“紫色黄金”之称; 蜂胶所含的化合物 包含黄酮类、酚酸类、酯类和氨基酸等，其中黄 酮类的含量非常高，远远超过一般的天然药物，所 以蜂胶又有“黄酮化合物宝库”的美称; 蜂胶表现出多种多样的生理活性，如抗炎、抗菌和降糖等，而这些作用与其所含有的黄酮有一定的关 系，故深入研究蜂胶总黄酮的稳定性，对保护蜂胶 中的活性成分具有重要的意义。

1 材料和方法

1． 1 药品与试剂

芦丁 ( 上海融合医药科技有限公司，批号 170523，含量 ＞ 98% ) 、蜂胶( 湖北省咸宁市咸安区 世佳蜜蜂养殖专业合作社) 、无水乙醇、75% 的乙 醇、乙酸钾、硝酸铝、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、苯 甲酸钠、蔗糖等，试剂均为分析纯。

1． 2 仪器与设备

AL104 电子天平( 瑞士梅特勒托利多) 、FW 177 中草药粉碎机( 上海哈瑞斯) 、昆山舒美KQ-500DB 型数 控超声清洗机( 昆山市超声仪器有限公司) 、AFC2000-G 实验室超纯水机( 武汉品冠仪器公司) 、 G6860A 紫外可见分光光度计( Agilent Technologies) 、Z32HKC 离心机( HEＲMLE Labortechnik) 。

1． 3 标准曲线的绘制

精密称取芦丁 10． 00mg 于 50mL 容量瓶，用 无水乙醇溶解，得芦丁储备液( 200mg /L) 。然后 分别稀释不同倍数，配制浓度为 4、8、12、16、20、 24、28、32、36mg /L 的标准溶液( 含醋酸钾和硝酸 铝溶液) 。通过紫外分光光度计( 415nm) 测定上 述不同浓度芦丁标准品的吸光度; 以芦丁的浓 度( C) 为横坐标，以吸光度( A) 为纵坐标，计算得 出相应的回归方程。

1． 4 蜂胶的前处理

将蜂胶原胶在 － 18℃ 冷冻 4h，取出后迅速粉 碎，过 60 目筛，留蜂胶粉备用。

1． 5 蜂胶总黄酮的提取和含量测定

精密称取 0． 5g 蜂胶粉，置于 15mL 的 EP 管 中，加 75% 乙醇溶解，静置 12h; 再将 EP 管放入超 声清 洗 机 中，设 置 功 率 为 70kHz、超 声 温 度 为 30℃，时间为 20min，进行超声提取。 将 EP 管置于高速离心机中，设置转速为 3600r/min，时间为 5min，离心后将上清液取至 50mL 的容量瓶中，加入 75% 的乙醇定容，得蜂胶 总黄酮供试液。取适量蜂胶总黄酮供试液，加入乙酸钾和硝 酸铝溶液，以空白管调零，于 415nm 处用紫外分光 光度计测定蜂胶总黄酮的吸光度。

1． 6 方法学考察

1． 6． 1 精密度试验

取同一芦丁储备液，分别制成 6 份对照品溶 液，在 1． 5 项下测定每份对照品溶液的吸光度值。

1． 6． 2 重复性试验

取同一蜂胶粉末，精密称取 0． 5g，共 5 份，按 照 1． 5 项下提取和测定蜂胶总黄酮。

1． 6． 3 稳定性试验

取同一份样品的蜂胶总黄酮的供试液，分别 于 0、2、4、8、12、24h，在 1． 5 项条件下测定并记录 吸光度值。

1． 6． 4 加样回收率试验

分别取 1、2、3、4、5、6mL 芦丁储备液加入 0. 5mL 蜂胶总黄酮供试液中，在 1． 5 项条件下测 定并记录吸光度值，计算回收率。

1． 7 食品添加剂对蜂胶总黄酮稳定性的影响

分别加入柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、苯甲酸 钠、蔗糖( 柠檬酸、苹果酸和抗坏血酸的浓度分别 为 0. 00、0． 01% 、0． 02% 、0． 04% 、0． 06% 、0． 08% 、 0. 10% 、0． 12% ，苯甲酸钠和蔗糖的浓度分别为 0. 00、0. 2% 、0． 4% 、0． 6% 、0． 8% 、1． 0% 、1． 2% ) 至蜂胶总黄酮供试液中，在 1． 5 项条件下分别于 6、12、24h 测定蜂胶总黄酮的吸光度。

2 结 果

2． 1 标准曲线与线性关系考察

如图 1 所示，标准曲线方程为 y = 0． 1315x － 0． 0092，r = 0． 9998，芦丁浓度在 4 ～ 36mg /L 范围 内呈良好的线性关系。

2． 2 方法学考察

精密度试验:6 份对照品溶液 ＲSD 值均小于3%。 重复性试验: 结果显示每个样品的蜂胶总黄 酮含量的 ＲSD 值均小于 3% 。 稳定性试验: 结果显示蜂胶总黄酮的吸光度 的 ＲSD 值均小于 3% 。 回收率试验: 各组分的回收率在 99． 81% ～ 103． 87% ，ＲSD 值均小于 3% 。

2． 3 柠檬酸对蜂胶总黄酮的影响

柠檬酸对蜂胶总黄酮吸 光度的影响，因其浓度不同而影响的程度有较大 的差异，浓度小于 0． 08% 的范围以内，蜂胶总黄酮 的吸光度有所增加，而当浓度大于 0． 08% ，蜂胶总 黄酮的吸光度有所降低。

2． 4 苹果酸对蜂胶总黄酮的影响

苹果酸浓度在 0． 01% 时， 6h 内蜂胶总黄酮的吸光度明显上升，12 h 内趋于 平稳，24 h 后 吸 光 度 明 显 下 降; 当 浓 度 大 于 0. 04% 时，吸光度值均下降，同时可以看出下降的 幅度随着时间的延长而增大。

2． 5 抗坏血酸对蜂胶总黄酮的影响

抗坏血酸的浓度在小于 0． 02%时，蜂胶总黄酮 的吸光度呈下降的趋势; 当浓度在 0． 02% ～ 0. 08% 的范围内，蜂胶总黄酮的吸光度随着抗坏血酸浓度 的增大而增加; 而当浓度在 0． 08% ～ 0． 12% 范围 内，蜂胶总黄酮的吸光度保持稳定。

2． 6 苯甲酸钠对蜂胶总黄酮的影响

将一定浓度的苯甲酸钠与蜂胶总黄酮混合， 待加入显色剂后，溶液产生黄色的絮状物，摇荡后 仍呈浑浊状，无法测定其吸光度。 2． 7 蔗糖对蜂胶总黄酮的影响 如图 5( 封三) 所示，蔗糖在允许浓度范围之 内( 0． 00% ～ 1． 20% ) ，对蜂胶总黄酮的影响较小。

3 讨 论

柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸和苯甲酸钠对蜂胶 总黄酮的稳定性都有影响，其影响程度与浓度和 作用时间有关。 不同浓度的柠檬酸对蜂胶总黄酮都有一定的 影响，可能是柠檬酸可促进 Al 3 + 与黄酮类化合物 相结合。 当抗坏血酸浓度小于 0． 08% 时，蜂胶总黄酮 的吸光度会受到一定的影响。而当抗坏血酸浓度在 0． 08% ～ 0． 12% 范围内，蜂胶总黄酮的吸光度 保持稳定，表明此浓度范围的抗坏血酸对蜂胶总 黄酮无明显影响。因此，此浓度范围的抗坏血酸 可作为蜂胶制品的添加剂。 苹果酸的加入，对蜂胶总黄酮的吸光度有较 大影响。同时随着苹果酸浓度和作用时间的增 加，蜂胶总黄酮越不稳定。表明苹果酸不宜作为 蜂胶产品的添加剂。此外，苯甲酸钠与黄酮类化 合物结合会产生淡黄色的絮状物，同样表明苯甲 酸钠不宜作为蜂胶产品的添加剂。 允许浓度范围之内( 0． 00% ～ 1． 20% ) 的蔗糖 对蜂胶总黄酮无明显影响，表明蔗糖可作为蜂胶 产品的添加剂。 近些年随着蜂胶在日用品和保健品市场的应 用越来越广泛，其主要成分( 蜂胶总黄酮) 的含量 和稳定性直接关系到产品的质量。在国家允 许的食品添加剂使用的浓度范围内，通过实验，分析各添加剂对蜂胶总黄酮稳定性的影响，为食品 添加剂在蜂胶产品的应用中提供科学依据，也为 蜂胶制品的安全使用提供保障。



 

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