总环烯醚萜的含量测定(昆山舒美KQ-500DE使用)

巴戟天 How 为茜草科植物，其根 入药，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功效，用于阳痿遗 精，宫冷不孕，月经不调，少腹冷痛，风湿痹痛，筋骨痿软。巴戟天主要成分包括蒽醌类、环烯醚萜苷类、糖类、氨基酸等。其中糖类成分一直是人类研 究的重点，但近些年来巴戟天所含的环烯醚萜类成分 也引起了研究者的关注。现代药理研究表明，巴戟天 属植物中环烯醚萜具有抗菌、抗氧化、抗肿瘤、抗炎及 镇痛等广泛的药理作用，为对该类成分开发进行深入 研究奠定了基础。巴戟天中单一环烯醚萜成分测定已 有较多研究，但总环烯醚萜类成分含量测定未见报导。

1 材料

1.1 仪器

UV- 1800紫外分光光度计（日本岛津仪器有限公 司）；昆山舒美KQ-500DE 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪 器有限公司）；水浴锅（国华电器有限公司）；BSA224SCW万分之一电子天平（塞多利斯科学仪器（北京）有限 公司）；BT25S 十万分之一电子天平（塞多利斯科学仪 器（北京）有限公司）；Milli-Q超纯水系统（美国Millipore 公司）。

1.2 试药

巴戟天（药材为实验室成员亲自赴各地采集，其产 地或来源见表1），经湖北中医药大学药学院中药资源 与中药化学湖北省重点实验室叶晓川研究员鉴定为茜 草科植物巴戟天 How的肉质根。甘 草（湖北天济中药饮片有限公司，批号：201608004）； 水晶兰苷（成都植标化纯生物技术有限公司，批号： 151209，纯度>98%）；食盐（湖北盐业集团有限公司专 营）；黄酒（浙江越景绍兴酒有限公司）；水为蒸馏水， 其余试剂均为国产分析纯（国药集团化学试剂有限公 司）。

2 方法与结果

2.1 巴戟天炮制品的制备

取编号 Y1（净巴戟天）炮制，制备巴戟肉、盐巴戟、 酒巴戟、制巴戟，一式三份。 巴戟肉：取净巴戟天100g，照蒸法（《中国药典》 2015版通则0213)，加水30mL 拌匀，润30min，蒸30min， 趁热去木心，得到巴戟肉及其木心，干燥。 盐巴戟：取净巴戟天100g，照盐蒸法（《中国药典》 2015版通则0213)，2%食盐水加入拌匀，润90min，蒸15 min，趁热去木心，干燥。 酒巴戟：取净巴戟天100g，加10mL 黄酒拌匀，润 60min，蒸30min，趁热去木心，干燥。 制巴戟：取甘草6g 加水50mL 微沸90min，过滤后 药渣加水50mL 微沸90min，合并滤液调为甘草汁100 mL。取净巴戟天100g，照煮法《( 中国药典》2015版通则 0213)，加100mL 甘草汁拌匀，润10min，煮至汁收尽，趁 热去木心，干燥。 另取净巴戟天直接剥取得到净巴戟肉及净巴戟木心。以上所有样品60℃干燥后粉碎，过40目筛，备用。

2.2 对照品溶液的制备

取水晶兰苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇配 制成浓度为0.65mg/mL 的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取巴戟天粉末约0.05g，精密称定，置于100mL锥形 瓶中，加入70%乙醇25mL，称重，浸泡30min，超声处理 60min，摇匀，滤过，即得供试品溶液。

2.4 显色条件

取供试液0.5mL于10mL试管，加70%的乙醇溶液至 1mL，加1mol/LHCl 溶液2mL，90℃水浴15min，冷却至 室温，加0.1%2，4-二硝基苯肼乙醇溶液0.5mL，摇匀， 90℃水浴25min，冷却至室温，加1mol/LNaOH溶液3mL， 室温放置1h，以70%的乙醇溶液为空白对照。

2.5 最大吸收波长的测定

精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1mL，按上述 显色条件显色，在400～800nm 范围内进行扫描。结果 表明，对照品和供试品在455～460nm处都有最大吸收， 本实验最大吸收波长选为455nm。

2.6 标准曲线的绘制

分别精密吸取水晶兰苷对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、 0.5、0.6mL 置入10mL 试管，加70%乙醇至1mL，按上述 显色条件进行显色，以70%乙醇反应液为空白在455nm 处测定吸光度，吸光度值分别为0.179、0.342、0.476、 0.612、0.768、0.931。以对照品浓度为横坐标（X），吸光 度值 (A) 为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得回归方程 Y=14.783X+0.03393，R 2 =0.9987。结果表明水晶兰苷在 0.01～0.06mg/mL 范围内线性关系良好。

2.7 方法学考察

2.7.1 精密度试验

取对照品溶液，按显色条件显色， 显色后 1h 连续测定 6 次吸光度，其吸光度值分别为 0.436、0.436、0.435、0.436、0.437、0.435，RSD= 0.178% ， 表明仪器精密度良好。

2.7.2 稳定性试验

取供试品溶液，按显色条件显色， 在 15min、30min、45min、60min、90min、120min测定其吸 光度，其吸光度值分别为 0.437、0.436、0.435、0.434、 0.435、0.434，RSD=0.271%，表明在 2h 内稳定性良好。

2.7.3 重复性试验

精密称取编号Y4 巴戟天粉末 6 份， 制成供试品溶液，按显色条件进行显色，测定吸光度并 计算 含量，结果分 别为 21.96%、20.39%、22.17%、 21.21%、22.39%、22.46%，平均含量 21.76%，RSD = 3.72%，表明此法重复性良好。

2.7.4 加样回收试验

精密称取编号 Y4 巴戟天粉末 9 份，每份 0.025g，分别精密加入水晶兰苷对照品 6.6mg、 5.5mg、4.4mg，一式三份，制备供试品溶液，按显色条件 进行显色，测定并计算回收率分别为 102.12%、98.07%、 96.38%，平均回收率为 98.85%，RSD=2.99%，表明此方 法准确度高。

3 讨论

本实验采用超声提取法制备供试品溶液，分别考察 了15min、30min、45min、60min、90min超声提取。结果 表明超声时间为60min 时供试品中总环烯醚萜含量最 高，故选取60min 为超声时间。 巴戟天生长在山坡上，广东省的肇庆市、云浮市为 主产区。实验结果显示，同一市不同县及同一县不同 乡镇所产巴戟天总环烯醚萜存在差异，这可能与巴戟 天生长的土质、海拔高度、阳光照射时间等有关。检测的23个样品总环烯醚萜含量差异较大，但大部分在 20%~30%之间。福建省4个不同生长年限样品含量测 定结果显示，巴戟天总环烯醚萜累积随着年限增长呈 先上升然后又下降的趋势，但其动态变化规律还需进 一步深入研究。


 

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