淡豆豉6种黄酮类成分质量控制研究

淡豆豉是以豆科植物大豆为主料，以桑叶、青蒿为辅料经过发酵加工而 成的制品。性苦、辛，凉。归肺、胃经。中医理论认 为淡豆豉具有解表，除烦，宣发郁热的功效，可用于感冒，寒热头痛，烦躁胸闷，虚烦不眠的症状。淡 豆豉主要活性成分为黄酮、皂苷、蛋白、多糖、氨基 酸、纤溶酶和挥发性等化合物。其中，黄酮类成 分中的大豆苷具有明显的抗骨质疏松作用，黄豆黄苷具有较高的 α－葡萄糖苷酶抑制活性，染料木 苷具有抗肿瘤和抗氧化活性，大豆苷元具有显著 的抗菌活性和降血糖作用，黄豆黄素具有促成 骨细胞增殖和抗氧化能力，染料木素也具有明显 抗肿瘤、抗氧化、降血脂、抗肝纤维化和改善更年期 症状等药理活性。

1 仪器与试药

1．1 仪器

1260 型高效液相色谱仪( 美国 Angilent 公司) ; CPA225D 型十万分之一分析天平( 德国 Sartorius 公司) ; KQ－500E 台式超声波清洗器( 昆山市 超声 仪 器 有 限 公 司) ; Milli － Q 超 纯 水 仪 ( 美 国 Millipore 公司) 。

1． 2 试 药

对 照 品 大 豆 苷 ( 批 号: MUST － 16031507) 、黄豆黄苷( 批号: MUST－ 17032503) ，染 料木苷( 批号: MUST－16021802) 、大豆苷元( 批号: MUST － 17101202 ) 、黄 豆 黄 素 ( 批 号: MUST － 17092210) 、染料木素( 批号: MUST－15090908) 均购 自成都曼思特生物科技有限公司，以上标准品纯度 均大于 98%。淡豆豉样品( 编号为 S1 ～ S13) 和淡豆 豉原料黑豆( 编号为 S14) 分别在市场和企业中收 集，S1～ S14 信息详见表 1。甲醇、乙腈为色谱纯( 德 国 Merck 公司) ; 甲酸为色谱纯( 上海阿拉丁试剂有 限公司) ，其余试剂均为分析纯。


2 方法与结果

采用 Phenomenex Luna C18色谱柱 ( 4．6 mm×250 mm，5 μm) ，流动相甲醇( A) －0．1%甲酸水溶液( B) ，梯度洗脱( 0～ 5 min，5% ～ 5% A; 5 ～ 8 min，5% ～ 30% A; 8 ～ 15 min，30% ～ 40% A; 15 ～ 20 min，40% ～60% A; 20～30 min，60% ～ 70% A; 30 ～ 33 min，70% ～5% A; 33 ～ 38 min，5% ～ 5% A) ，柱温 30 ℃，流速 0． 8 mL·min－1 ，进样量 10 μL，检测波长 254 nm。在此色谱条件下 6 种对照品理论板数均大 于 5 000，色谱峰对称性良好( 见图 1) 。

精密取大豆苷、黄 豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素和染料木素 对照品适量，精密称定，加入甲醇超声溶解，制成质 量浓度分别为 1． 056、1． 112、0． 968、1． 024、0． 134 和 1．024 mg·mL－1 的单一对照品储备液，备用。分别 精密量取上述对照品溶液适量，置同一容量瓶中，加 入 50%甲醇至刻度，即得大豆苷 52．8 μg·mL－1 、黄 豆黄苷 55．6 μg·mL－1 、染料木苷 48．4 μg·mL－1 、大 豆苷元 51．2 μg·mL－1 、黄豆黄素 53．6 μg·mL－1 和 染料木素 51．2 μg·mL－1 的混合对照品溶液。取重复性试验同批次淡豆豉粉 末约 1 g，精密称定，平行 6 份，每份分别精密加入近 似等量的 6 种对照品，按“2．2．2”项下方法制备供试 品溶液，按“2．1”项下测定各成分的峰面积，计算各 个化合物的回收率和回收率的 RSD 结果见表 3，结 果表明该方法回收率良好。

3 讨论

检测波长的选择，通过对 6 种分析物进行 DAD 全波长扫描，大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷 元、黄豆黄素和染料木素的最大吸收波长分别为 250、258、260、248、257、260 nm，综合 6 种黄酮类成 分在 254 nm 处均有良好的紫外吸收。因此，选择 254 nm 作为检测波长。