昆山舒美KQ500DE用于测定亚麻籽油苦味肽

随着现代人对养生的关注，亚麻籽油因具有多 种保健功能日渐得到消费者的青睐。然而，亚麻 籽油在储存中常易氧化变苦，Brühl 等鉴定证 实亚麻籽油的关键苦味化合物为一种环八肽 ( Cyclolinopeptide E，CLE) ，俗称苦味肽。

1 材料与方法

1． 1 试验材料

1． 1． 1 原料与试剂

亚麻籽油，由宁夏君星坊食品科技有限公司 提供。 SPE 硅胶小柱，上海安谱公司; Cyclolinopeptide E 标准品，纯度 99% ，加拿大 Prairie Tide 化学品公 司; 无水甲醇、乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷、无水乙 醇，分析纯，国药集团化学试剂有限公司; 乙腈、甲 醇，色谱纯，百灵威科技有限公司。

1． 1． 2 仪器与设备

Waters Acquity 型超高效液相色谱仪，Waters Synapt Q － TOF － MS 质谱仪，Masslynx 4． 1 色谱工作 站; Waters1525 高效液相色谱仪，Waters 2996 可变 波长二极管阵列检测器; KQ-500de，昆山舒美超声仪器有限公司; Ｒ － 501 旋转 蒸发器，上海申顺生物科技有限公司; SHZ － 3 循环 水多用真空泵; AL204 电子天平，梅特勒 － 托利多仪器有限公司。

1． 2 试验方法

1． 2． 1 溶剂萃取法提取亚麻籽油中苦味肽

1． 2． 1． 1 甲醇溶剂萃取法

参考 Aladedunye 等的环肽提取方法。称取 1 g 亚麻 籽 油 加 入 10 mL 色 谱 纯 甲 醇，旋 涡 振 荡 1 min，超声处理 1 h，离心后收集上清液。

1． 2． 1． 2 乙醇溶剂萃取法

参考利嘉祥等的方法。称取 5 g 亚麻籽油， 以料液比 5∶ 8 加入无水乙醇，旋涡振荡 5 min。离心 后吸取上清液，重复萃取 3 次，合并萃取液，40 ℃ 旋 蒸脱溶，用色谱级甲醇将烧瓶底部的油移至离心管 中，旋涡振荡并离心，吸取上清液至 10 mL 的容量瓶 中，定容。

1． 2． 2 固相萃取法提取亚麻籽油中苦味肽

比较填料为 0． 5、1、2 g 不同规格 SPE 硅胶小柱 的前处理效果，参考 Gui 等的样品前处理方法。 先分别将硅胶柱用 1、2、4 mL 正己烷活化，将 1 g 油 样溶于 1 mL 正己烷，上柱。在真空条件下，依次用 正己烷、正己烷 － 乙酸乙酯( 体积比 8∶ 2) 、正己烷 － 乙酸乙酯( 体积比 5∶ 5) 各 10 mL 进行洗脱，将小柱 抽干后，再分别用乙酸乙酯、甲醇 － 二氯甲烷( 体积 比 1∶ 9) 各 10 mL 进行洗脱，收集最后两步洗脱液， 合并后于 40 ℃旋蒸脱溶，用色谱级甲醇分 2 ～ 3 次 复溶圆底烧瓶底部的环肽，并通过超声促进溶解，定 容至 5 mL。

2 结果与讨论

取一苦味亚麻籽油为试验原料，分别用溶剂萃 取法和固相萃取法进行前处理，通过 HPLC 测定 CLE 含量。所有前处理方法测得的 HPLC 谱图显示，通过溶剂萃取法和固相萃取法前处理，CLE 均 可以得到良好的分离效果，所测 CLE 在色谱图中均 于保留时间 19 min 左右出峰，前处理不影响 CLE 的 出峰。但是，就不同前处理方法油样的各色谱图的 杂峰而言，与 SPE 硅胶小柱前处理相比，溶剂萃取 前处理后油样的色谱图中保留时间在 28 min 以后 有较多杂峰，其中含有较多的甘油三酯，这些杂质的 存在对于保护液相色谱柱、提高柱效是极为不利的。 溶剂萃取预处理亚麻籽油的 HPLC 谱图之所以有大 量杂峰，是由于油脂在萃取溶剂中存在一定程度的 溶解，尤其是乙醇萃取法样品，由于其对油脂溶解性 相对更好，杂峰尤为明显，即使以油脂溶解性较 差的甲醇为例，甲醇萃取法预处理油样的 HPLC 谱 图中，所含杂质的峰面积是 CLE 峰面积的 7． 14 倍， 而 SPE 硅胶小柱前处理油样将甘油三酯及其他杂 质有效去除，其色谱图所含杂质的峰面积是 CLE 峰 面积的 4． 23 倍( 甲醇萃取预处理和 SPE 预处理亚 麻籽油 HPLC 谱图见图 1，其余色谱图略) 。因此， 为了保护色谱柱、提高柱效、延长柱子使用寿命，固 相萃取法预处理较溶剂萃取更理想。

不同方法预处理的除杂效果存在较大差异，但 是就分析检测方法的样品前处理而言，仅仅实现有 效除杂是不够的，脱除杂质的同时，还须实现待测物 的有效保留，因此进一步比较了同一亚麻籽油样品 经不同前处理后，所测得的 CLE 含量，评估不同前 处理方法对亚麻籽油 CLE 测定的有效性。

3 结 论

本文比较了 HPLC 定量测定亚麻籽油苦味肽的 溶剂萃取法和固相萃取法的纯化富集前处理效果。 就除杂效果而言，固相萃取法比溶剂萃取法所提取 的环肽样品中甘油三酯及其他杂质显著减少，有利 于保护液相色谱柱、提高柱效; 就提取效果而言，使 用填料规格为 0． 5 g 的 SPE 硅胶小柱可以得到较好 的分离及富集效果。经过定性分析、准确度及精密 度评价，证明此方法准确可靠，可作为测定亚麻籽油 中苦味肽含量的前处理方法。



 

免责声明：文章仅供学习和交流，如涉及作品版权问题需要我方删除，请联系我们，我们会在第一时间进行处理。