灵芝为多孔菌科真菌赤芝 (Ganoderma lucidum Karst),或紫芝(Ganoderma sinense)的干燥子实体。外 形呈伞状,菌盖肾形、半圆形或近圆形,为多孔菌科真 菌灵芝的子实体。具有补气安神、止咳平喘的功效,用 于治疗眩晕不眠、心悸气短、虚劳咳喘。主要分布于浙 江、黑龙江、吉林、安徽、江西、湖南、贵州、广东、福建等 地。灵芝具有双向调节人体机能的作用,能过双向 调节人体机能平衡,使人的免疫系统得到快速的提 升,恢复人体的内脏和细胞达到正常化。
1 材料与仪器
1.1 主要材料
灵芝孢子油:广东现代汉方科技有限公司。 齐墩果酸对照品:中国食品检定研究院;冰醋酸、 香草醛、高氯酸、无水乙醇等(分析纯):广州化学试 剂厂。
1.2 主要仪器
UV-2450 紫外可见分光光度计:日本岛津公司; HWS24 型电热恒温水浴锅、DHG-9425A 型电热鼓风 干燥箱:上海一恒科学仪器有限公司;昆山舒美KQ-500DE超声波清洗机:Fisher Scientific 飞世尔实验器材 (上海)有 限公司。
2 试验方法
2.1 试样液制备
准确称取灵芝孢子油样品 0.1 g 于 100 mL 容量 瓶中,加入无水乙醇 80 mL,超声提取 1 h。冷却至室 温 20 ℃后,用无水乙醇定容至刻度线,摇匀,作为供 试液。
2.2 标准储备液的制备
称取 10 mg 齐墩果酸对照品,置 100 mL 容量瓶中, 用无水乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制成约 0.1 mg/mL 的齐墩果酸对照品储备液。
2.3 测定波长的选择
取配置好的标准溶液 0.6 mL 于 10 mL 比色管中, 水浴蒸干,加入 0.2 mL 5 %香草醛-冰乙酸溶液和 0.8 mL 高氯酸轻轻振荡,于 70 ℃水浴加热 15 min,取 出冷却加入 5 mL 乙酸后,在可见光区进行扫描,确定 最大吸收波长 540 nm。齐墩果酸标准溶液的吸收曲线 扫描见图 1。
3 10批不同厂家灵芝孢子油样品测定
分别购买 10 批不同厂家的灵芝孢子油,分别准确 称取 0.10 g 样品于 10 0 mL 容量瓶中,加入无水乙醇 80 mL,超声提取 1 h。冷却至室温 20 ℃后,用无水乙醇 定容至刻度线,摇匀,作为供试液。取 0.2 mL 供试液于 具塞比色管,置于干燥箱内,90 ℃烘干溶剂。分别加入 0.2 mL 5 %香草醛-冰乙酸溶液和 0.8 mL 高氯酸,轻轻 振荡,于 70 ℃水浴加热 15 min,取出,立即置冰水冷却 5 min。用 5 mL 移液管准确移取冰乙酸 5.0 mL 稀释,摇 匀,在 30 min 内用紫外分光光度计在 540 nm 处测其 吸光度 A。通过线性回归方程计算得到供试液中总三 萜的含量见表 10。
从表 10 中可以看出市售的 10 种灵芝孢子油都能 满足其标示值,其中产品 2 和产品 6 的总三萜实测值 最高,达到 34.2 %,产品 4 的实测值最低,为 23.7 %。
4 结论
以香草醛乙酸溶液及高氯酸为显色剂,并通过水 浴加热的条件,采用分光光度法是测定总三萜的常用 方法,但其水浴时间、温度、显色剂用量和高氯酸用量 都会影响所测总三萜含量。通过单因素逐步分析,总 结出在加入 0.2 mL 5 %香草醛-冰乙酸溶液和 0.8 mL 高氯酸,于 70 ℃水浴加热 15 min 的条件下,测试灵芝 孢子油中总三萜的含量能够达到精密度好,准确度 高,对样品空白影响较小,且方法有很好的回收率,能 够为不同灵芝孢子油中总三萜含量的对比提供较好 的参考方法。
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