KQ-500E在化妆品中4种禁用酚类物质分析中的使用

我国化妆品行业迅速发展，近两年来一直保持 18%～ 20% 增长，化妆品已经成为人们生活的必需 品，我国现也成为仅次于美国的全球第二大化妆品市场。其中，美白类化妆品的产量得到快速增长， 2019 年将占据半壁江山。研究表明，酪氨酸酶是人体内参与黑色素合成的关键酶，因此可通过抑制 酪氨酸酶的活性来阻断黑色素生成，从而达到美白效果。带有酚羟基的化合物( 如间苯三酚、4-硝基愈 创木酚、酚酞、地乐酚) 因具有与酪氨酸相似的结构特征，多用作酪氨酸酶的抑制剂，从而起到一 定的美白效果。但间苯三酚具有致敏性，可引起呕吐等急性中毒。酚酞会引起口腔炎症。4-硝基愈创 木酚和地乐酚对皮肤均有一定的刺激性，且地乐酚有剧毒。

高效液相色谱仪: 配二极管阵列检测器( 1260，美国安捷伦科技公司) ; 分析天平: 感量 0. 01 g ( M22002 /02，瑞士梅特勒托利多公司) 和 0. 1 mg( XP105，瑞士梅特勒托利多公司) ; 涡旋振荡器( MS3 型，德国艾卡公司) : 最高转速不低于 3 000 r/min; 离心机( KDC － 40，科大中仪公司) : 最高转速不 低于 4 000 r/min; 超声波清洗仪( KQ-500DE，昆山市超声仪器公司) ; 氮吹浓缩仪( N － EVAP 112，美 国 Organomation 公司) ; 超纯水仪( PUＲELAB Pulse，英国 ELGA 公司) 。 间苯三酚、地乐酚、4-硝基愈创木酚和酚酞标准品( 纯度大于 96% ，德国 Dr. Ehrenstorfer 公司) ; 乙腈( 色谱纯，美国 Fisher 公司) ，甲醇、乙酸乙酯、丙酮、氯化钠、四氢呋喃、磷酸、乙酸铵( 分析 纯，广州化学试剂厂) ，超纯水( 18. 2 MΩ·cm) 。

用 1 mL 丙酮溶解适量的间苯三酚、地乐酚、4-硝基愈创木酚和酚酞标准品，再用乙腈配成质量浓 度为 5 000. 0 mg /L 的单标标准贮备液。分别吸取4 种化合物单标贮备液各 2 mL，用乙腈定容至10 mL， 配成质量浓度为 1 000. 0 mg /L 混合标准中间液，置于 4 ℃避光保存。临用前，用乙腈将混合标准中间 液逐级稀释至所需浓度的系列标准工作溶液。

称取试样0. 2 g( 精确至0. 01 g) 于15 mL 具塞塑料离心管中，加 入2. 0 mL 提取溶剂( 水基类: 乙酸乙酯; 膏霜类: 甲醇; 乳液类、粉类: 甲醇 + 丙酮( 1 ∶ 1，体积比) ) ，3 000 r/min 涡旋振荡2 min。粉类化妆品提取液11 000 r/min 离心3 min，取上清液过 0. 45 μm 滤膜，待测定。 水基类、膏霜类和乳液类化妆品则取提取液上清层，40 ℃氮吹至干。依次加入100 μL 乙腈和900 μL 水，分 别涡旋复溶取出，合并溶液，11 000 r/min 离心3 min，取上清液过0. 45 μm 滤膜，待测定。

称取试样0. 1 g( 精确至0. 01 g) 于15 mL 具塞塑料离心管中，加入1 mL 四氢呋喃，涡 旋溶解后加入 2 mL 甲醇，3 000 r/min 涡旋振荡 2 min，4 000 r/min 离心 3 min，取上清液，40 ℃ 氮吹 至干，依次加入 100 μL 四氢呋喃和 900 μL 甲醇 + 丙酮( 1 ∶ 1) 溶剂，分别涡旋复溶取出，合并溶液， 11 000 r/min 离心 3 min，取上清液过 0. 45 μm 滤膜，待测定。1. 4 色谱条件 色谱柱: Diamonsil C18柱，5 μm，250 mm × 4. 6 mm( i. d． ) ; 流速: 0. 8 mL/min; 流动相 A: 乙腈，B: 10 mmol/L 乙酸铵( 含0. 2%磷酸) ; 流动相梯度: 0 ～1 min，10%A; 1 ～5 min，10%～25%A; 5 ～7 min，25% ～40%A; 7 ～9 min，40%～70%A; 9 ～12 min，70%A; 12 ～15. 01 min，70%～95%A; 15. 01 ～17 min，95%A; 17 ～17. 01 min，95%～10%A; 17. 01 ～20 min，10%A; 柱温: 40 ℃; 检测波长: 230 nm; 进样量: 10 μL。

比较了分别以乙腈 + 水和乙腈 + 10 mmol /L 乙酸铵为流动相时 4 种酚类的分离效果。结果表明，4 种酚类在乙腈 + 10 mmol /L 乙酸铵的流动相体系中可获得更好的分离度，但地乐酚的峰形较差，这是由于酚羟基易解离出氢离子，离子态的地乐酚易导致其色谱峰展宽。通过加入 0. 2% 磷酸，调节溶液 pH 值至3. 0，地乐酚在此缓冲盐体系下呈分子态，经 C18柱分离后峰形尖锐、对称。综合考虑，选择乙 腈 + 10 mmol /L 乙酸铵( 含 0. 2% 磷酸) 为流动相体系。液相色谱通常采用梯度洗脱以使复杂样品中 的各组分能按各自适宜的容量因子( k) 达到良好 的分离效果。本实验考察了乙腈 + 10 mmol /L 乙 酸铵( 含 0. 2% 磷酸) 为流动相的梯度洗脱程序。 按 “1. 4”的优化梯度洗脱程序可使 4 种酚类物 质达到基线分离。样品经溶剂萃取后，为提高检测灵敏度，将待测液 40 ℃氮吹至干后选用合适的溶剂进行复溶，定 容至 1 mL 待测。针对水基类、乳液类和膏霜类化妆品，考察了乙腈、甲醇、乙腈 + 水( 1 ∶ 9) 3 种溶剂 的复溶效果。结果显示，采用单纯有机相进行复溶时，间苯三酚的色谱出峰时间前移，色谱响应低。 选择乙腈 + 水( 1 ∶ 9) 混合溶剂进行复溶时，间苯三酚的色谱出峰时间无漂移，且色谱峰响应高，但地 乐酚的色谱峰响应降低至纯溶剂提取时的 20% 以下。采用优化方法对 4 种酚类物质进行线性与灵敏度考察，并分别按信噪比( S /N) 为 3 和 10 计算检出 限( LOD) 和定量下限( LOQ) 。以目标化合物浓度( x，mg /kg) 为横坐标，响应值的峰面积( y) 为纵坐标 建立标准曲线，计算目标化合物的线性范围、线性方程及相关系数。结果显示，4 种待测物在 5 ～ 500 mg /kg 范围内线性良好，r 2 ＞ 0. 99，LOD 为 1. 5 ～ 6. 0 mg /kg，LOQ 为 5. 0 ～ 20. 0 mg /kg。随机抽取市售的 31 个化妆品，其中水基类化妆品 6 个，乳液类化妆品 8 个、膏霜类化妆品 10 个、 粉类化妆品 4 个、蜡基类化妆品 3 个，按本方法进行检测，31 个化妆品均未检出间苯三酚、4-硝基愈 创木酚、酚酞及地乐酚。

建立了化妆品中禁用的间苯三酚、4-硝基愈创木酚、酚酞和地乐酚的检测方法。样品经溶 剂提取、氮气吹干、复溶后采用高效液相色谱法测定，外标法定量。本方法前处理简单、灵敏度高， 适用于水基类、乳液类、膏霜类、粉类及蜡基类化妆品中地乐酚等 4 种禁用物质的检测。



 

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