KQ-500DE在测定没药中3个倍半萜类成分的含量的使

没药为橄榄科（Burevaceae）没药属（Commiphora） 植物地丁树 Commiphora myrrha Egnl. 或哈地丁树 Commiphora molmol Egnl. 的 干 燥 树 脂，分 为 天 然 没 药和胶质没药，主产于索马里与埃塞俄比亚 ，其质 量标准收载于《中华人民共和国药典》2015 年版一 部 。没药药性辛、苦，平，归心、肝、脾经，有特异的 香气，在中国以及印度等地具有悠久的用药历史，具 有活血、消肿、止痛的功效，主治瘀血心腹诸痛、跌扑 伤痛等 。

安 捷 伦 公 司 Agilent 1260 型高效液相色谱仪，包括 G1311C 四元泵、在线脱气机、G1315D DAD、G1329B 自 动 进 样 器、LC1260 色 谱 工 作 站、 G1316A 柱温箱；赛多利斯公司 Sartorius BT25S 电子 天平（十万分之一）、Sartorius BSA124S-CW 电子天 平（万分之一）；昆山市超声仪器公司 KQ-500DE 型 数控超声波清洗器。

化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的对照品均为本课题 组自制，通过 1H-NMR、13C-NMR、MS 等手段确证 了其结构，纯度经 HPLC 法检测均 >98%（面积归一 法）。乙腈（Sigma 公司）为色谱纯，水为 Milli-Q 超 纯水，甲醇及乙醇（国药集团化学试剂有限公司）、磷 酸（西陇科学股份有限公司）为分析纯。6 批没药药 材均购自于药材市场，由周国平主任药师鉴定为地丁 树 Commiphora myrrha Engl. 的干燥树脂。

精密称取化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ 的对照品适量，加甲醇制得质量浓度分别为 0.018 4、 0.029 0 和 0.025 8 mg·mL-1 的混合溶液，即得。

取没药药材粉末（过 3 号筛）约 0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，密塞，称量，超声（功率 500 W，频率 40 kHz）处 理 0.5 h，放冷，再称量，用甲醇补足减失的量，摇匀， 过 0.45 μm 微孔滤膜，即得。

采用资生堂 CAPCELL PAK C18 色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱温 30 ℃，以乙腈（A）-0.1% 磷酸水溶 液（B）为流动相，梯度洗脱（0~40 min，41%B；41~60 min，44%B），流速 1.0 mL·min-1，检测波长 210 nm，进样 量 10 μL；在上述色谱条件下，样品色谱中与各对照品对 应的吸收峰的理论板数均不低于 3 000，色谱图见图 1。

4 方法学考察

4.1　线性关系考察　

精密吸取“2.1”项下混合对照 品溶液 1、2、5、10、15、25，分别按“3”项下色谱条件 进样分析，以进样量 X（μg）为横坐标，峰面积 Y 为纵 坐标，绘制标准曲线并进行回归计算，得 3 个成分的 线性回归方程，结果见表 1。

4.2　精密度试验　

精密吸取混合对照品溶液 5 μL， 按“3”项下色谱条件连续进样 6 次，依次测定峰面 积，结果化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ峰面积的 RSD（n=6）分别0.35%、0.17%、0.11%，表明仪器精密度良好。

精密吸取供试品溶液 10 μL，按 “3”项下色谱条件，于 0、1、2、4、8、12、24 h 分别进 样测定，结果化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ峰面积的 RSD（n=7） 分别为 0.62%、0.70%、0.69%，表 明 供 试 品 溶 液 在 24 h 内稳定。

取同一批没药药材粉末（过 3 号 筛）6 份，各约 0.2 g，精密称定，按“2.2”项下方法制 备供试品溶液，并按“3”项下色谱条件进样测定， 化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的平均含量（n=6）分别为 0.791、 1.430、1.471 mg·g -1，RSD 分别为 0.91%、1.1%、 0.76%。

检测波长的选择　应用 DAD 检测器在 190~400 nm 范围内对化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ进行光谱扫描；结果 表明，在 210 nm 波长附近 3 个成分吸光系数均最大， 干扰少且稳定，故选择 210 nm 作为检测波长。供试品溶液制备方法的考察　考察了回流提取 法和超声提取法对化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ含量测定的影 响，结果显示超声提取法方便且能提取完全，故选择 超声提取法。提取溶剂考察了乙腈溶液、甲醇溶液、 乙醇溶液，结果显示甲醇溶液提取时化合物Ⅰ、Ⅱ和 Ⅲ含量均较高。提取时间考察了 0.25、0.5、1.0 h，结 果显示 0.5 h 可提取完全。提取体积考察了 15、25、 50 mL，结果显示无明显差别，故将提取体积定为25 mL。　流动相的确定　考察了乙腈 - 水、乙腈 -0.1% 磷 酸 水 溶 液、甲 醇 -0.1% 磷 酸 水 溶 液、甲 醇 - 水 4 个溶剂系统，结果显示以乙腈 -0.1% 磷酸水溶液为 流动相，所得色谱峰峰形较好，分离效果最佳；同时 考察了采用 41% 乙 腈 -0.1% 磷 酸 水 溶 液、42% 乙 腈 -0.1% 磷酸水溶液以及本实验的梯度洗脱，结果 以 41% 乙腈 -0.1% 磷酸水溶液为流动相时化合物Ⅲ 出峰时间太晚，以 42% 乙腈 -0.1% 磷酸水溶液为流 动相时化合物Ⅰ将杂质峰包进去，故采用本实验的梯 度洗脱。本实验对 6 批不同产地没药药材中化合 物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ 3 个成分的含量进行测定，结果显示不 同样品含量差异较大。本文建立了没药中 3 个主要 倍半萜成分的 HPLC 含量测定方法，色谱峰分离效果 较好，基线较平，重现性较好，简便可靠，可为进一步 完善没药药材的质量评价方法提供参考依据。