使用超声清洗器对超高效液相色谱的分析

高血压是常见的慢性疾病，也是心血管病最重要 的危险因素，其导致的冠心病、脑卒中及慢性肾病等主 要并发症给家庭和社会均造成沉重负担。随着社会和 经济的发展，高血压发病率呈逐年增加趋势，已成为我 国目前重要的公共卫生问题 。降压类药物起效快， 疗效明确，应用广泛，但具有依赖性、停药后反弹以及 长期服用对肝肾的损害等不良反应 ，这使得辅助降 血压类中成药和保健食品普遍受到高血压患者的青 睐。

Agilent 1290 Infinity II 超 高 效 液 相 色 谱 仪（配 有 G7120A 型二元泵，G7167B 型进样器，G7116B 型柱温箱， G7114B 型检测器），Agilent 6545 Q-TOF 质谱仪（Agilent公司），METTLER TOLEDO XP-205 电子天平（METTLER TOLEDO 公司），KQ-800KDE 超声仪（昆山市超声仪器有限公司），Milli-Q 超纯水处理系统（Millipore 公司）。

盐酸阿米洛利（批号 100310-200201）、盐酸可乐 定（批号 071-8903）、氨苯蝶啶（批号 100429-200401）、 盐酸地巴唑（批号 100420-200301）、酒石酸美托洛尔 （批号 100084-200101）、盐酸特拉唑嗪（批号 100375- 200502）、盐酸哌唑嗪（批号 100164-200402）、富马酸 比索洛尔（批号 100711-200401）、盐酸普萘洛尔（批 号 100783-200401）、盐 酸 咪 达 普 利（批 号 100748- 200401）、盐酸地尔硫（批号 100161-200503）、吲达帕 胺（批号 0257-9501）、苯磺酸氨氯地平（批号 100374- 200602）、盐 酸 尼 卡 地 平（批 号 100586-200401）、厄 贝沙坦（批号 100607-200301）、盐酸喹那普利（批号 100568-200401）、氯 沙 坦 钾（批 号 100597-200501）、 利 血 平（批 号 0041-9509）、硝 苯 地 平（批 号 100338- 200502）、缬沙坦（批号 100651-200401）、盐酸氟桂利 嗪（批 号 100844-200501）、尼 群 地 平（批 号 100585- 200501）、尼 莫 地 平（批 号 100270-200002）、非 洛 地 平（批 号 100717-2005-01）、拉 西 地 平（批 号 100741- 200501）均购自中国食品药品检定研究院。

乙腈（批号 177795）、甲醇（批号 175167）、甲酸（批 号 168642）均为色谱纯，购自赛默飞世尔科技（中国）有 限公司。质谱所用调谐液、参比液均购自 Agilent 公司。

市售辅助降血压类保健食品10批（包括片剂3批口服液2批，颗粒剂1批，胶囊剂3批，软胶囊1批），降压 类中成药5批（包括丸剂2批，胶囊剂1批，颗粒剂2批）。

对照品溶液　精密称取对照品适量（精确至 0.01 mg），分别用甲醇配制成每 1 mL 各含 100 μg 的 对照品储备液。取各对照品储备液适量，根据需要以 甲醇逐级稀释，配制成混合对照品溶液（质量浓度约 1~1 000 ng·mL-1，取 9 个浓度点分别为 1、5、10、50、 100、200、500、700、1 000 ng·mL-1）。片剂、丸剂、颗粒剂等固体制剂 研细后取样；胶囊剂则将内容物研细，并将胶囊壳剪 碎后取样；粉末剂直接取样：取上述样品 1 次服用量， 精密称定，置 100 mL 具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50 mL，称量，超声（频率 40 kHz，功率 800 W）提取 30 min 后放至室温，用甲醇补足减失的量，用 0.22 μm 滤膜过滤，即得。口服液等液体制剂：精密量取制剂 10 mL，置 50 mL 量瓶中，加入甲醇 30 mL，超声（频 率 40 kHz，功率 800 W）提取 30 min 后放至室温，以甲醇定容至刻度，用 0.22 μm 滤膜过滤，即得。离子源：电喷雾离子源（ESI）；采 集模式：正离子模式；扫描范围：m/z 100~1 700。离 子源参数：雾化气（N2）压力 310 kPa；干燥气（N2） 温度 320 ℃，流速 8 mL·min-1；鞘气（N2）温度 400 ℃，流速 11 mL·min-1；毛细管电压：4 000 V；碎裂电 压：140 V；锥孔电压：65 V；二级谱碰撞诱导裂解电 压（collision-induced dissociation，CID）5~40 eV。 选 择参比离子 m/z 121.050 9、m/z 922.009 8 实时校正。

液质联用的流动相既要能够达到分离的效果， 更为重要的是要保证待测化合物离子化的效率，以满 足质谱的检测。根据待测降压类化合物的结构特征， 选择正离子采集模式。实验中考察了甲醇 - 水、乙 腈 - 水、甲 醇 -0.1% 甲 酸 水 溶 液、乙 腈 -0.1% 甲 酸 水 溶 液、甲 醇 -5 mmol·L-1 甲 酸 铵 水 溶 液、乙 腈 - 5 mmol·L-1 甲酸铵水溶液等流动相组成对分离效果 及质谱相应的影响。结果表明乙腈 -0.1% 甲酸水溶 液作为流动相各降压类化合物峰形及分离度相对较好，质谱响应信号最强，故最终选择乙腈 -0.1% 甲酸 水溶液作为流动相进行梯度洗脱。 毛细管电压和离子化电压均为能够影响目标化 合物检测灵敏度的关键参数，经实验优化，毛细管电 压为 4 000 V 及离子化电压为 140 V 时，各目标降压 类化合物准分子离子峰响应较好。并且为获取降压 类化合物更多碎片离子信息，采用 10~40 eV 的碰撞 能量范围对各化合物的最佳碰撞能量进行优化。某些不法商家会将化学药物涂于胶囊壳上或添 加至胶囊壳中，以达到添加的隐蔽性，所以对胶囊类保健食品和中成药的胶囊壳的检测也很重要。测定 时，将一次服用量的内容物取出后，需将相应的胶囊 壳剪碎并与内容物一同进行前处理。