人参二醇酰化产物的合成及其舒张血管活性评价

三七皂苷或人参皂苷是三七或人参的主要活性 成分，其主要具有抗肿瘤、免 疫 调 节、抗 炎 镇 痛 等 作 用，其酸水解后水解产物之一为人参二醇。 本课题 组长期从事人参皂苷元类化合物的结构修饰，已经制备了较多的人参二醇或者人参三醇衍生物，脂 肪 酸类，氨基酸类与人参二醇或者原人参二醇结合的衍 生物中均有比人参二醇或者原人参二醇更有效的抗 肿瘤活性化合物。 本课题组前期经还原胺化反应将人参二醇降解产物的 3 位羰基转变成氨基，再与酰 化试剂以及磺酰氯等试剂反应，得到一系列降解人参 二醇的衍生物 17 个，采用 MTS 法对 5 株肿瘤细胞株 进行活性评价， 找到一些有细胞毒活性的化合物。 肉桂酸（ 又名桂皮酸） ，是一种非常重要的植物源的天 然产物，是从肉桂皮或安息香分离出的有机酸，肉桂 酸及其衍生物具有抗老年痴呆，抗结核，抗菌， 抗氧化，抗肿瘤，抗心血管系统疾病等多种 生物活性。 本文通过人参二醇与酰氯或者肉桂酸（ 酰 氯） 试剂反应合成人参二醇衍生物或者人参二醇肉桂 酸类衍生物，并且评价其舒张血管活性，期望找到一 些舒张血管活性较好的化合物。

AV-400 核磁共振仪或 AV-500 核磁共振仪 （ 德 国 Bruker 公 司 ） ；LCQ -Advantage LC -MS（ Thermo Finnigan） ；RE-2000A 旋转蒸发仪 （ 上海亚荣生化仪 器厂） ；电子天平 （ 赛多利斯） ；DF-101S 集热式恒温加热磁力搅拌器（巩义市予华仪器有限公司） ；KQ-100 型超声清洗器（ 昆山市超声仪器有限公司） ；SHZ-D 循环水式真空泵 （ 巩 义市予华仪器有限公司） ；Wire Myograph System DMT 血管张力测定仪（ Danish MyoTechnology） 。 SD 大 鼠 （ 昆明医科大学实验动物中心提供） ； GF254 薄层层析板； 柱层析用硅胶 （ 青岛海洋化工 厂） ；高效薄层层析板（ 默克） ；人参二醇（ 上海思达医 药化工科技有限公司） ；

在带有加热、搅拌、回流冷 凝管等装置的 25 mL 二颈瓶中分别加入人参二醇 50 mg，二甲基丁酰氯 151.9 mg，DMAP 44 mg，吡啶 8 mL， 在常温下搅拌 24 h。 减压蒸干吡啶后， 加入 30mL 水后用乙酸乙酯萃取 （ 100 mL×3） ， 合并萃取 液， 用 10%盐酸洗 3 次、 饱和食盐水洗 3 次， 无水 Na2SO4 干燥，过滤，滤液浓缩，硅胶（ 300-400 目，石油 醚：乙酸乙酯） 柱色谱纯化得化合物 1。

在带有加热、搅拌、回流冷凝 管 等 装 置 的 25 mL 二颈瓶中分别加入人参二醇 50mg，肉桂酰氯 151.9 mg，DMAP，44 mg，吡啶 8 mL，在 常温下搅拌 24 h。 减压蒸干吡啶后，加入 30 mL 水后 用乙酸乙酯萃取（ 100 mL×3） ，合并萃取液，用 10%盐 酸洗 3 次、饱 和食盐水洗 3 次，无水 Na2SO4 干 燥，过 滤，滤液浓缩，硅胶（ 300-400 目，石油醚：乙酸乙酯） 柱色谱纯化得化合物 2 （ 23.5 mg） 。

在二颈反应瓶中加入 人 参二醇（ 1eq，0.05 mmol） 、肉桂酸 衍 生 物（ 3eq，0.15 mmol） 和 10 mL CH2Cl2，搅拌使其充分溶解 后，加 入 过量 DCC 和少量 DMAP，室温搅拌反应过夜。 过滤， 滤液用饱和食盐水洗涤一次，加入无水 Na2SO4 干燥， 再次过滤，滤液减压浓缩，硅胶（ 300-400 目，石油醚： 乙酸乙酯） 柱色谱纯化得到化合物 3-10。

在室温 （ 22±2）℃条件下，SD 大鼠用 10%水合氯醛（ 0.35 mL/100 g） 腹腔注射麻醉 处死后， 并迅速取出心 脏和大脑于 4 ℃ MOPS-PSS 液中。 体式解剖显微镜下，用显微手术器械将脑基底 动脉（ BA） 周围组织分离干净，将冠状动脉和脑基底 动脉剪成约 1 mm 动脉环，穿金属丝备用。

体式解剖显微镜下， 用两根 60 μm 的金属丝穿过血管环， 分别挂置于 DMT 浴槽 中的方向相反的一对金属固定器上 。 浴 槽 中 盛 MOPS-PSS 工 作 液 5 mL， 恒 温 37 ℃并 且 持 续 通 入 95%O2 和 5%CO2 的 混 合 气 体。 每 隔 20 min 换 1 次 MOPS-PSS 工作液， 平衡 60 min。 然后更换 MOPSKPSS 工作液（ 含 60 mM K+ ） 5 min，检测血管环活性。 当收缩力为预负荷 2 倍左右时认为活性合格，可用于 实验。 然后按照预先计算的给药体积加药。

BA 平 衡并检测血管环活性合格后， 加入 60 mM KCl 收缩 血管，待收缩达到最大值且平衡后，将事先 DMSO 配 制成浓度为 100 mM 的受试样品 15 μL 加入到 5 mL 的营养液中就成为最终浓度（ 300 μM） 。 用 PowerLAB 数据记录和分析系统采集数据。 每一个受试药物取 8 根血管环进行重复试验。

采用相对张力值 （ %） 来表示，相对张力值小于 50%时，认为有较为显 著的血管舒张活性，相对张力值越小表示药物对血管 的舒张活性可能越好。 相对张力值计算公式为：相对 张 力 值=（ X-平 衡 值）（/ 60 mMK+收 缩 值-平 衡 值） × 100%（ X 表示给药后 PowerLAB 采集到的有效数值） 。 阳性对照为人参皂苷 Rg1。

由表 1 实验结果可以看出，化合物 1，3，4，7 有显 著的舒张 BA 血管活性，其活性高于阳性对照人参皂 苷 Rg1。

本研究通过人参二醇经酰化反应得到 10 个酰化 产物， 利用 SD 大鼠脑基底动脉建立的离体模型，将 10 个衍生物进行了舒张 SD 大鼠脑基底动脉活性的 初步筛选研究，发现化合物 1，3，4，7 的相对张力值均 小 于 50%， 差异有统计学意义 ， 初 步 表 明 化 合 物 1，3，4，7 对 SD 大鼠脑基底动脉具有一定的舒张活 性，根据相对张力值的计算公式结合药理实验的设计 方案，初步推测认为相对张力值越小，舒张血管活性可能越好，但需进一步的体内药理活性研究。 这些实验结果为人参二醇的结构改造和构效关系的探讨提 供了一定依据，为进一步寻找更加理想舒张血管活性 的人参二醇衍生物提供了思路。