地皮菜提取液研究（昆山舒美KQ-400KDE使用）

1 材料与方法 

1.1 材料与试剂 

地皮菜：山西忻州农贸市场；氯化硝基四氮唑蓝 （nitroblue tetrazolium chloride，NBT）、吩 嗪 硫 酸 甲 酯 （phenazine methosulfate，PMS）、还原型辅酶 1（nicoti－ namide adenine dinucleotide，NADH）、二苯基苦基苯肼 （DPPH）、2，2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二 铵盐（ABTS）：Sigma 公司；试剂均为分析纯。 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、LB 培 养基：忻州师范学院微生物实验室提供。 

1.2 仪器 

紫外-可见分光光度计（UV-1800）：上海美谱达仪 器有限公司；超声波清洗器（KQ-400KDE）：昆山舒美超声仪器有限公司；超净工作台（SW-CJ-2F）：苏州净化 设备有限公司；全自动高压蒸汽灭菌锅（D-1）：上海乔 跃电子有限公司；恒温恒湿生化培养箱（HWS-150）： 北京中兴伟业仪器有限公司。 

1.3 试验方法 

1.3.1 地皮菜活性成分的提取 

地皮菜水洗，烘干、粉碎、过筛 60 目筛。称取5.000 g 地皮菜粉末 4 份分别置于 300 mL 锥形瓶中， 分别加入 100 mL 的蒸馏水、40 %乙醇、70 %乙醇和 无水乙醇，在 65 ℃下超声辅助提取 30 min，超声功率 为 320 W。冷却离心，导出上清液，将滤渣重复提取 2 次。合并滤液，抽滤，浓缩至 200 mL，用提取剂定容至 250 mL。 

1.3.2 抗氧化能力测定

向比色管中加入0.30、0.60、0.90、1.20、1.50、1.80、2.10、 2.40、2.70、3.00 mL 的地皮菜提取液，加蒸馏水至 3.00 mL， 依 次 加 6 mmol/L FeSO4 溶 液 2.00 mL，2.4 mmol/L 的 H2O2 溶液 2.00 mL，摇匀，静置 10 min，加入 6 mmol/L 水杨酸溶液 2.00 mL，摇匀，37 ℃水浴 30 min，离心 （3 000 r/min）10 min。取上清液于 520 nm 测吸光度 （A），以蒸馏水代替水杨酸做参比调 i 零（A）j 。以蒸馏水 代替样品液做空白对照（A0 ），平行测定 3 次。吸取 1.00 mL 150 μmol/LNBT，1.00 mL 60 μmol/L PMS 于比色管中，分别加入 0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、 1.20、1.40、1.60、1.80、2.00 mL 样品液，补加蒸馏水 至 4.00 mL，混匀，加入 1.00 mL 468 μmol/L NADH（由 16 mmol/L Tris-HCl 在 pH 8 时配制而成）。于 560 nm处 测定样品吸光度（A），以蒸馏水代替 i PMS 溶液做参比 参比调零（A）j 。以蒸馏水代替样品液做样品空白对照 （A0 ），平行测定 3 次。将 5.00 mL 7 mmol/L 的 ABTS 和 88 μL 140 mmol/L 的过硫酸钾混合，在 25 ℃、避光的条件下静置过夜，形 成 ABTS+ ·储备液，使用前用无水乙醇稀释成工作液。 在 734 nm 波长下的吸光度为 0.7±0.02。吸取 0.04、 0.08、0.12、0.16、0.20、0.24、0.28、0.32、0.36、0.40 mL 地 皮菜提取液于比色管中，加蒸馏水至 0.40 mL。加入 2.00 mL ABTS·+ ，振荡 30 s，25 ℃下静置 6 min。在 734 nm 波长处测定地皮菜提取液样品的吸光度值 （A），以 i 80 %乙醇溶液代替 ABTS+ ·溶液做参比调零（A）j 。以蒸 馏水代替样品液做样品空白对照（A0 ），平行测定 3 次。

2 结果与分析

OH 是目前所知活性氧中对生物体毒性最强，危 害最大的一种自由基，可与生物体内多种分子作用， 造成糖类、氨基酸、蛋白质、核酸等物质氧化损伤，使细 胞坏死或突变。因此·OH 清除率是反映药物抗氧 化作用的重要指标。地皮菜提取液清除羟基自由基能 力见图 1。

4 种地皮菜提取液都具有不同程度 的清除 DPPH·能力，且清除能力与提取液用量呈正相 关。当提取液用量较小时，4 种提取液清除能力接近。 但随着提取液用量的增加，水提取液和 40 %乙醇提取 液清除 DPPH·能力显著增加，明显优于 70 %乙醇和 无水乙醇提取液。当提取液用量为 3.00 mL 时，水提取 液、40 %乙醇提取液、70 %乙醇提取液和无水乙醇提 取液对 DPPH·的清除率分别为：96.73 %、87.52 %、 72.07 %、52.23 %。

3 结论 

地皮菜不同提取液均具有明显的清除羟基自由 基、超氧阴离子自由基、DPPH·和 ABTS+ ·作用和还原 能力。其清除作用和还原能力与提取液用量呈正相 关。地皮菜水提取液清除 4 种自由基作用和还原能力 最强，无水乙醇提取液的清除作用和还原能力最弱。 抑菌作用分析表明地皮菜水提液对金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌的具有良好的抑制作用，而无水乙醇提 取液对大肠杆菌的抑制作用最强。

免责声明：文章仅供学习和交流，如涉及作品版权问题需要我方删除，请联系我们，我们会在第一时间进行处理。