测定归柏化瘀胶囊中芍药苷含量-KQ-250DB使用

归柏化瘀胶囊由当归、黄柏、白芍、醋延胡索、甘草五味中药 组成，具有活血化瘀、清利湿热之功效，用于慢性非细菌性前列 腺炎血淤兼湿热证，症见尿频，尿急，尿痛，尿道口常有少量黏 液，口苦，小便短黄。方中当归主要含有机酸类、香豆素类、黄酮 类成分，其中阿魏酸具有抗血小板聚集，抑制血小板 5- 羟色胺 释放，抑制血小板血栓素的生成，增强前列腺素活性，镇痛，缓 解血管痉挛等作用。黄柏主要含小檗碱、黄柏碱等生物碱类 成分，具有抗细菌、真菌、病毒及其他病原微生物的作用。白 芍主要含苷类、萜类、黄酮类、鞣质类等，其主要有抗炎、抗菌、保 肝、镇痛等 。

1 仪器和试药

Agilent 1200 高 效 液 相 色 谱 仪，DAD 紫 外 检 测 器，美 国 Agilent 公司；Mettler AE240 电子分析天平，瑞士 Mettler 公司； BSA224S-CW 型电子分析天平，德国 Sartorius 公司；Centrifuge 5415D 高速离心机；Milli-Q Academic 纯水机，美国 Millipore 公 司；昆山舒美KQ-250DB 型超声波清洗仪，昆山市超声仪器有限公司。 归柏化瘀胶囊（南京正大天晴制药有限公司生产，批号：160401、160501、160601）；芍药苷对照品（批 号：110736- 201704，含量以 94.9% 计）、阿魏酸对照品（批号：111787-201002 含量以 100% 计）均购自中国食品药品检定研究院。乙腈（色谱 纯，美国天地公司），水为去离子水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为 Phenomenex Luna C18 色谱柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm）；流动相：乙腈 - 0.1% 磷酸；流速：1.0 ml/min，梯度洗脱； 检测波长：235 nm；柱温：30℃ ；进样量 10 μl。

2.2. 对照品溶液制备

分别精密称取芍药苷和阿魏酸对照品适量，加 50% 甲醇制 成每 1 ml 含芍药苷、阿魏酸分别为 120.0μg、20.0 μg 的混合对 照品溶液。

2.3 供试品溶液制备

取装量差异项下的本品内容物，混匀后，研细，取约 0.5 g， 精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 50% 甲醇 25 ml，先称定 重量，超声处理（功率 250 W，频率 40 kHz）30 min，待冷却至室 温后再次称定重量，用 50% 甲醇补足减失的重量，混匀后滤过， 取续滤液，离心，作为供试品溶液。

2.4 定量限

按 2.1 项下上述色谱条件，取芍药苷、阿魏酸对照品溶液， 逐级稀释后，进行试验， 结果芍药苷、阿魏酸的定量限分别为 3.7ng （S/N ＝ 9.7），11.9 ng （S/N ＝ 10.5），检测限分别为 0.42 ng （S/ N ＝ 3.2），0.33 ng （S/N ＝ 3.3）。

2.5 线性关系考察

精密称取芍药苷和阿魏酸对照品适量，制得每 1 ml 含芍 药苷 1 042.4 μg、阿魏酸 125.6 μg 的混合溶液，依次精密量 取 混 合 对 照 品 溶 液 0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 ml 于 5 ml 量 瓶 内，加 50% 甲醇稀释至刻度后，摇匀，注入液相色谱仪，测定， 以进样浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲 线，回归方程分别为 Y ＝ 746.74X － 202.92，r ＝ 0.999 9；和 Y ＝ 6 246.4X － 610.91，r ＝ 0.999 9。芍药苷、阿魏酸分别在 20.848 ～ 416.960 μg/ml 和 2.512 ～ 50.240μg/ml 范围内呈良 好的线性关系。

3 讨论

3.1 检测波长的选择

为让待测成分获得较好分离度，且具较高的灵敏度，采用 DAD 检测器，在 200 nm 至 400 nm 范围内扫描，选择待测成分 最佳波长，最终选择在 235 nm 检测 2 个成分的含量。

3.2 色谱条件的确定

比 较 了 乙 腈 -0.1% 磷 酸、甲醇 - 水、乙腈 - 水三种流动 相系统，结果采用乙腈 - 0.1% 磷酸系统待测成分色谱峰峰形 较好，进一步优化洗脱条件，最终确定洗脱比例。进而又考察 了 0.8 ml/min、1.0 ml/min、1.2 ml/min 不 同 流 速 和 25 ℃、30 ℃、 35℃不同柱温对待测成分的影响，结果在流速 1.0 ml/min 及柱 温 30℃时分离效果最佳。比较了 Phenomenex Gemini C18 柱、 Waters C18 柱及 Agilent Extend C18 柱，结果在本方法的色谱条件 下，各待测成分分离效果最佳，分离度均大于 1.5。

3.3 专属性考察

采用 DAD 检测器，分别对供试品中芍药苷和阿魏酸进行峰 纯度验证，结果峰纯度均符合规定。同时制备缺当归和白芍的 阴性供试品溶液，在芍药苷和阿魏酸色谱峰位置无干扰峰，表明 所测定的芍药苷和阿魏酸具有良好的专属性。

3.4 供试品制备方法优选

考察了乙醇、80% 乙醇、50% 乙醇、甲醇、80% 甲醇、及 50% 甲醇等不同提取溶剂对 2 个成分提取效果，结果采用 50% 甲醇 作为提取溶剂时 2 个成分提取率最佳，固选择 50% 甲醇作为提取溶剂。

4 结论

本研究建立的归柏化瘀胶囊中芍药苷和阿魏酸含量测定测 定方法，能够有效用于评价本品质量。