测定参麦注射液中11个成分的含量-KQ300DA使用

参麦注射液由古方生脉饮衍变而来，处方由红参 和麦冬等药材构成。传统医学认为，参麦注射液具有 益气固脱和养阴生津的功效；现代药理学证实，参麦 方剂具有抗心肌缺血、去除氧自由基等药理学功效， 临床上被广泛用于心血管疾病、免疫功能低下及各种 慢性疾病治疗 。

1　仪器与试药

1.1 仪器

安捷伦 1290 infinity 超高效液相色谱仪（包含四元梯度泵、自动进样器、柱温箱和 DAD 检测器， 安捷伦科技公司）；MS105DU 型电子天平（0.01 mg 梅特勒 - 托利多（常州）测量技术有限公司）；昆山舒美KQ300DA型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。

1.2 试药

参麦注射液由杭州正大青春宝有限公司提供 （批号 1706271、1611071、1611081、1611082，规格 10 mL·支 -1，每 1 mL 含红参 0.1 g）。 对照品人参皂苷 Rg1 （批号 Z26S7X21730）、人参 皂苷 Re（批号 B10M8S35243）、人参皂苷 Rf（批号 P09M8F31017）、20（S）-人参皂苷 Rh1 （批号 Z12M8X35790） 、20（S）- 人参皂苷 Rg2 （批号 M27N8S49074）、人参 皂苷 Rb1 （批号 Z06M8L30693）、人参皂苷 Rc（批号 P24F8F30057）、人参皂苷 Rb2 （批号 P09M8F35575）、 人参皂苷 Rd（批号 Z27F8X30060）、20（S）- 人参皂 苷 Rg3 （批号 Z01D7X25885）含量均为 98%，均购于 上海源叶生物科技有限公司。 乙 腈（色 谱 纯）和 超 纯 水（色 谱 纯）购 自 默 克 公司。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Aglient Eclipse Plus C18（ 2.1 mm×50 mm， 1.8 μm）；乙腈（A）- 水（B）为流动相，采用二元梯度 洗脱（0~10 min，19%A；10~32 min，19%A → 28%A，32~39 min，28%A → 36%A，39~49 min，36%A → 45%A），流速 0.3 mL·min-1；柱温 30 ℃ ；检测波长 203 nm；进样量 1 μL。

2.2 溶液配制

2.2.1 对照品储备液

精密称取对照品人参皂苷 Rg1 3.80 mg、人参皂苷 Re 2.20 mg、人参皂苷 Rf 0.99 mg、20（S）- 人参皂苷 Rh1 0.19 mg、20（S）- 人参皂 苷 Rg2 0.22 mg、人参皂苷 Rb1 6.26 mg、人参皂苷 Rc 2.68 mg、人参皂苷 Rb2 2.34 mg、人参皂苷 Rb3 0.31 mg、人参皂苷 Rd 1.30 mg、20（S）- 人参皂苷 Rg3 0.28 mg，分别置 1 mL 量瓶中，加 20% 乙腈水溶解并稀释 至刻度，制成单一对照品储备液。

2.2.2 混合对照品溶液

分别精密吸取上述单一对 照品储备液人参皂苷 Rg1 761 μL、人参皂苷 Re 441 μL、人参皂苷 Rf 499 μL、20（S）- 人参皂苷 Rh1 192 μL、20（S）- 人参皂苷 Rg2 221 μL、人参皂苷 Rb1 782 μL、人参皂苷 Rc 536 μL、人参皂苷 Rb2 470 μL、人参皂 苷 Rb3 310 μL、人 参 皂 苷 Rd 654 μL、20（S）- 人 参皂苷 Rg3 285 μL，置 10 mL 量瓶中，加初始比例流 动 相 至 刻 度，制 成 人 参 皂 苷 Rg1、Re、Rf、Rh1、Rg2、 Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd、Rg3 的质量浓度分别为 0.380、 0.220、0.099、0.019、0.022、0.626、0.268、0.234、 0.031、0.130、0.028 mg·mL-1 的混合对照品储备液。

2.2.3 供试品溶液

取参麦注射液，过 0.22 μm 微孔 滤膜，收集续滤液，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 系统适用性和专属性试验

分别取流动相溶液 （空白对照）、混合对照品溶液和供试品溶液，按“2.1” 项下色谱条件进样测定，记录色谱图，见图 1。结果显 示，混合对照品溶液与供试品溶液中各指标成分色谱 峰的理论塔板数均大于 5 000，分离度均大于 1.5，拖尾 因子在 0.9~1.0 之间，表明系统适用性良好。在样品色 谱图中，分别有与对照品保留时间一致的特征峰，表明各化合物之间分离度好，无干扰，专属性良好。

2.3.2 线性关系考察

精 密 吸 取“2.2.2”项 下 混 合对照品储备液 0、0.8、0.5、0.4、0.25 mL，分 别置 1 mL 量 瓶 中，加 流 动 相 定 容，摇 匀，即 得 系 列 浓度的的混合对照品溶液。在上述色谱条件下进样测定，以测定的峰面积为纵坐标（Y），相应对照 品 的 浓 度 为 横 坐 标（X），绘 制 标 准 曲 线。 结 果 11个成分的线性关系良好，回归方程和相关系数见 表 1。

2.3.3 精密度试验

精密吸取“2.2.2”项下混合对照 品溶液，按上述色谱条件连续进样 6 次，记录峰面积。 结果显示，11 个人参皂苷峰面积的 RSD 均小于 2%， 说明仪器精密度良好。

2.3.4 稳定性试验

取参麦注射液样品，按“2.2.2”项 下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件分别于 0、2、 4、8、12、24 h 进样分析，11 个人参皂苷峰面积的 RSD 均小于 3%，表明供试品溶液在 24 h 内稳定性良好。

2.3.5 重复性试验

取同一批次的参麦注射液，平行 制备 6 份供试品溶液，进样测定并计算各人参皂苷成分含量。结果显示，样品中人参皂苷 Rg1、Re、Rf、Rh1、 Rg2、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd、Rg3 平均含量分别为 0.136 8、0.081 3、0.040 1、0.097 6、0.098 8、0.179 7、0.096 5、 0.083 5、0.012 7、0.052 3、0.012 6 mg·mL-1，RSD 分别为 0.44%、0.57%、2.2%、1.2%、1.3%、0.33%、1.8%、1.1%、 4.2%、0.52%、3.9%，表明该方法重复性良好。 2.3.6 加样回收率试验 取已知含量的供试品溶液 （批号 1706271）0.5 mL，按已知含量的 100% 水平加 入混合对照品 0.5 mL，充分混匀，平行制备 6 份，过 0.22 μm 微孔滤膜后，进样测定。

3 讨论

3.1 色谱条件的优化

考察了不同流动相系统（乙腈 - 水、0.05% 磷酸 二氢钾缓冲盐 - 乙腈等）对分离效果的影响，同时考 察不同柱温（20、25、30、35、40 ℃）和流速（0.1、0.2、 0.3、0.4、0.5 mL·min-1）对分离度的影响，结果显示，柱 温 30 ℃，流速为 0.3 mL·min-1 时各色谱峰分离度最 优，并且能保持柱压在合理范围内；考察了进样量对 分离度的影响，结果进样量为 1 μL 时峰形最佳，大于 1 μL 时，色谱峰峰形不好，小于 1 μL 时，峰面积太小影 响积分。综合考虑，最终确定了“2.1”项的色谱条件。

3.2 与 HPLC 比较

本实验采用 1.8 μm 小颗粒填料色谱柱，相比于 HPLC 使用的常规色谱柱，这一基于小粒径的分析法 具有更高的效率、更佳的数据质量，能够显著地缩短 分析时间，45 min 内即可同时测定参麦注射液中 11 个成分。同时，在保证所测定皂苷成分含量结果一致的情况下，时间节省了近 50 min。

4 结论

近年来，随着人们对传统中药的安全及质量需求 的不断提升，企业对中药质量控制的加速投入，药品 分析检测的工作量急剧增加，也带来了提升分析检测 效率的现实需求。本实验采用 UHPLC，可在 45 min 内对参麦注射液中 11 个活性成分同时进行测定，方法稳定可靠，操作简单，为快速全面控制中药注射剂 提供了实验依据。